目的 HTRA1热休克蛋白作为热休克丝氨酸蛋白酶家族成员之一,近年来被发现与老年黄斑变性(AMD)的发病密切相关。本研究探讨HTRA1基因在视网膜血管内皮细胞(RF/6A)中的表达及对RF/6A细胞生物学特性的影响。 方法 通过慢病毒感染技术在体外培养的RF/6A细胞中过表达HTRA1基因,并观察其作用。采用荧光显微镜观察细胞感染效率,细胞免疫组化观察HTRA1蛋白在RF/6A细胞中的表达部位,通过RT-PCR和Western Blot检测HTRA1mRNA和蛋白水平的表达, 并分别应用MTT法、Transwell小室法、Matrigel胶管腔形成实验及流式细胞仪对细胞的增殖、迁移、管腔形成能力及细胞周期进行检测。 结果 HTRA1蛋白在细胞核及细胞浆中均有表达,HTRA1基因慢病毒感染的RF/6A细胞中HTRA1在mRNA和蛋白水平的表达量明显增加,细胞增殖、迁移、管腔形成能力及细胞周期均受到明显抑制。 结论 HTRA1蛋白在RF/6A细胞中具有一定的表达,增强HTRA1基因的表达抑制了RF/6A细胞的增殖、迁移及管腔形成能力,THRA1基因可能通过影响视网膜血管内皮细胞的生物学功能参与AMD的进程。 |