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抗血管生成作用的VEGFxxxb家族在视网膜色素上皮细胞中的表达
作者:范思均  文章来源:解放军总医院  点击数257  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进
CNV是渗出型AMD致盲的根本原因。缺氧在渗出型AMD相关的CNV形成中起着重要作用。缺氧可显著增加RPE细胞分泌VEGF-A从而促进CNV生成。近年来研究表明,VEGF-A依选择性剪接方式的不同,可形成具有促血管生成作用的VEGFxxx家族和具有抗血管生成作用的VEGFxxxb家族。本文在mRNA和蛋白水平检测模拟缺氧状态下ARPE-19细胞中VEGFxxxb的表达,旨在观察VEGFxxxb在常氧和缺氧ARPE-19细胞中的表达变化,为探讨VEGFxxxbCNV形成过程中的作用提供理论依据。
本文以人RPE细胞系ARPE-19细胞为研究对象,化学诱导剂氯化钴模拟其缺氧状态,分别于不同时间点收获细胞或上清液,应用RT-PCR检测VEGFxxxVEGFxxxb mRNA的表达,Western blot检测VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白表达,ELISA检测细胞上清中VEGF-A蛋白和VEGFxxxb蛋白含量。
ARPE-19细胞在常氧及诱导缺氧后,均可检测到VEGFxxx家族和VEGFxxxb家族的mRNA表达。缺氧后VEGFxxx mRNA的表达增加,而VEGFxxxb mRNA的表达则减少。Western blot检测到VEGFxxxb家族蛋白,并显示出尤以VEGF165b表达最强。细胞缺氧后,总VEGF-A蛋白的表达有逐渐增加趋势,而VEGF165b则表达量逐渐减少,至缺氧12 h后显著减少。细胞上清中VEGFxxxb蛋白含量由常氧时(166.82 ± 2.55pg/ml下降至缺氧24 h125.35 ± 2.10pg/ml,而总VEGF-A蛋白则由(294.27 ± 11.97pg/ml上升至(582.26 ± 12.98pg/mlVEGFxxxb蛋白含量占总VEGF-A蛋白含量的比例随缺氧时间的延长,由常氧条件下的(56.71±1.02%,下降至缺氧24 h的(21.53±0.08%
ARPE-19细胞常氧时VEGF165 mRNAVEGF165b mRNA的表达水平相当,缺氧后VEGF165 mRNA的表达水平增加而VEGF165b mRNA的表达水平降低。ARPE-19细胞内VEGFxxxb蛋白表达以VEGF165b表达最强。常氧时总VEGF-A蛋白以VEGFxxxb占主导,缺氧后VEGFxxxb占总VEGF-A比例下降。
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