目的 探讨ski基因对HLECs的上皮-间叶样转化影响及其在后发性白内障中作用机制。
方法 构建pLenO-DCE-c-Ski载体，制备慢病毒HIV-c-Ski/GFP和HIV-GFP。培养人眼晶状体上皮细胞(HLECs)，HIV转导HLECs。细胞分组：1）TGFβ2诱导组；2）TGFβ2+HIV-GFP组；3）TGFβ2 +HIV-c-Ski/GFP；4）空白细胞组。免疫印迹检测晶状体上皮细胞转基因表达，证实所采用病毒载体可以转导人晶状体上皮细胞。转导后24时后观察并记录GFP表达情况和细胞形态变化。免疫荧光检测晶状体上皮细胞a-SMA和缝隙连接蛋白43表达。免疫组化检测细胞外基质蛋白纤维连接蛋白FN表达。
结果 TGF-β2诱导HLEC上皮-间叶样转化，细胞从类椭圆形、多角形逐渐变为长梭形,且细胞间隙增大。Westen-blot检测显示SKI基因在细胞中整合并且有效表达, SKI基因下调TGF/Smad2/3的表达。TGF-β2能够诱导晶状体上皮细胞表达a-SMA、FN。HIV-c-Ski/GFP转导后HLECs的a-SMA，缝隙连接蛋白43和纤维连接蛋白表达减低。
结论 TGF-β2诱导HLEC上皮-间叶样转化过程中TGF/smad磷酸化激活,提示TGF/smad参与了HLEC向间叶样转化的过程。c-Ski可以通过抑制TGF-β细胞因子途径来调控晶状体上皮细胞肌动蛋白骨架和ECM表达，抑制上皮间叶样转化，防治后发性白内障。