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PAX6 –siRNA对人晶体上皮细胞功能的影响
作者:黄婉荣  文章来源:厦门大学附属厦门眼科中心  点击数327  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 设计有效抑制PAX6基因表达的siRNA序列,构建相应的真核表达载体,转染入人晶体上皮细胞(HLE-B3,观察PAX6 –siRNAHLE-B3增殖、凋亡的影响。
方法 分别构建PAX6的野生型表达载体;同时构建沉默PAX6PAX6-siRNA 真核表达载体,分别转染入HLE-B3,以FQ-PCRWestern-blot检测HLE-B3PAX6的表达情况,以MTS法及细胞生长曲线、细胞小室侵袭实验和克隆形成能力检测PAX6HLE-B3功能改变的影响。
结果 转染细胞48h后,PAX6 –siRNA组(实验组)中PAX6mRNA表达水平是对照组的0.450625倍;蛋白水平是对照组的0.1194倍,组间比较差异具有统计学意义(P<0.05);转染72h之后,实验组G1期细胞占到41.6%G2期占到27.5%;而对照组G1期的细胞占到29.5%G2期的细胞占到43.7%;实验组增殖指数为140.4%,对照组的增殖指数为239%
结论 体外化学合成的PAX6 –siRNA表达载体在分子水平及蛋白水平上均能明显降低HLEs 细胞中PAX6的表达,并因而有效抑制了HLEs细胞的增殖,加速了其凋亡,为探讨后发障发病机理并为其防治方法建立初步理论基础。

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