目的 观察单独培养及与muller细胞共同培养的牛视网膜血管内皮细胞(BRVEC)在不同氧环境及糖环境下丙酮酸激酶(PKM1,PKM2)、血管内皮生长因子(VEGF)和HIF1α的表达变化及相互关系；探讨氧分压变化与牛视网膜血管内皮细胞中糖代谢及VEGF的相关性及可能机制。
方法 氧诱导造成BRVEC低氧模型（1%O2，5%O2）、常氧模型（10-12%O2，相当于视网膜实际正常氧分压），分为低氧高糖BRVEC组、低氧正常糖BRVEC组，低氧高糖muller cell共同培养BRVEC组、低氧正常糖muller cell共同培养BRVEC组和正常对照组，共分为10组。低氧诱导组为含1%、5%氧浓度下高糖与正常糖培养基的BRVEC组及与muller共同培养的BRVEC组干预培养24h；正常对照组为正常氧浓度（类似视网膜实际氧环境的10%氧浓度）及正常糖浓度下单独及共同培养的BRVEC24h.免疫荧光染色法观察正常对照组和低氧及高氧诱导组的BRVEC中PKM1，PKM2、VEGF以及HIF1α的表达。蛋白质免疫印迹(Western blot)检测各组间PKM1, PKM2、VEGF以及HIF1α的蛋白表达变化及相关性。
结果 免疫荧光染色结果显示，低氧诱导组BRVEC细胞质内见到VEGF表达，低氧诱导组BRVEC细胞核内PKM2较正常对照组明显增强。Western blot检测结果显示，低氧高糖诱导组HIF1α蛋白和PKM2蛋白表达均明显升高（1%O2组高于5%O2组），PKM2在低氧、正常氧、高氧浓度下的表达呈递减关系。muller细胞共同培养的BRVEC尽管处于1%O2浓度下，正常血糖组HIF1α及PKM2的表达都下调了，与muller细胞共同培养的BRVEC在1%O2浓度下高糖组的HIF1α和PKM2明显上调了。单独培养的BRVEC，随着氧浓度的增高PKM2呈下调趋势，1%，5% O2浓度时高糖培养使HIF1α表达上调了，10%O2浓度下（相当于视网膜正常氧浓度下）无论糖浓度如何，HIF1α没有明显的表达。
结论 低氧诱导的BRVEC中HIF1α, PKM2的表达增加，低氧及高糖使HIF1α及PKM2明显上调，muller细胞共培养可能下调了缺氧时HIF1α及PKM2的表达，muller细胞及PKM2在牛视网膜血管内皮细胞的异常代谢过程发挥了一定作用。 |
