目的 滤过术后瘢痕化是滤过手术失败的主要原因，瘢痕化的发生与转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）密切相关。前期我们通过SELEX技术筛选得到靶向TβRⅡ（转化生子因子βⅡ型受体）的核酸适配体（Aptamer），证明了该适配体对TβRⅡ具有封阻作用，然后使用壳聚糖纳米微粒对适配体进行包裹，初步保持和延长了适配体的生物活性。本研究在前期实验基础上，证明了核酸适配体-壳聚糖纳米微粒[CS(Apt)-NP]对抗TGF-b2促人Tenon’s囊成纤维细胞（HTFs）转化的作用较裸核酸适配体更持久。
方法 取4-7代人Tenon’s囊成纤维细胞，使用TGF-b2、Aptamer、CS(Apt)-NP等刺激细胞，Western Blot检测各实验组细胞表达α-SMA的区别，从而观察使用壳聚糖纳米微粒包裹前后，Aptamer对抗TGF-b2作用的改变；在DNase I存在的情况下使用TGF-b2、Aptamer、CS(Apt)-NP等刺激细胞，Western Blot检测各实验组细胞表达α-SMA的区别，细胞免疫荧光检测各实验组α-SMA在HTFs的定位表达情况，从而观察壳聚糖纳米微粒对Aptamer的保护作用；使用TGF-b2、Aptamer、CS(Apt)-NP等刺激细胞24h和72h，Western Blot检测各实验组细胞表达α-SMA的区别，从而观察壳聚糖纳米微粒对Aptamer的缓释作用。
结果 1. Aptamer及CS(Apt)-NP均能明显抑制α-SMA的表达，但24h时CS(Apt)-NP的作用不如Aptamer强，CS(Apt)-NP对TGF-b2的干扰作用未随浓度增大而增强；2. 在DNase I存在的情况下，Aptamer对抗TGF-b2的作用不明显，而CS(Apt)-NP仍能明显抑制α-SMA的表达；3.24h时Aptamer及CS(Apt)-NP均能明显抑制α-SMA的表达，72h时Aptamer对抗TGF-b2的作用不明显，而CS(Apt)-NP仍能明显抑制α-SMA的表达。
结论 核酸适配体-壳聚糖纳米微粒能够有效对抗TGF-b2促人Tenon’s囊成纤维细胞的转化作用达72h，并能保护核酸适配体免于被DNase I降解。初步证明了核酸适配体-壳聚糖纳米微粒用于对抗滤过泡瘢痕化的可行性。 |
