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蛋白质棕榈酸乙酰转移酶基因在小鼠眼内的表达及功能
作者:朱瑜洁  文章来源:上海交通大学医学院附属新华医院  点击数252  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 棕榈酰化是细胞内常见的蛋白质翻译后修饰,蛋白质棕榈酰化通过影响被修饰蛋白质在细胞内的定位、转运以及稳定性,从而影响该蛋白质的功能。本课题的目的在于研究蛋白质棕榈酸乙酰转移酶(PAT)基因在小鼠眼发育期眼组织中的表达以及其对于对小鼠视网膜祖细胞分裂和分化的影响
方法 采用胚胎13.5天,出生后112C57BL/6小鼠在显微镜下分离得到晶状体、神经视网膜层、以及包绕晶状体和神经视网膜的球壁组织(包括色素上皮层),分别提取总RNA后用RT联合qPCR的方法测定已知23PAT基因的表达。另外采用出生后1天的C57BL/6小鼠神经视网膜组织进行细胞的原代悬浮培养,并加入一定浓度广谱PAT抑制剂(2-bromopalmitate)处理,随后提取总RNA后用RT联合qPCR的方法检测其底物基因以及视网膜细胞特征性转录因子的表达情况。
结果 我们的实验结果表明有15PAT基因在C57BL/6小鼠眼组织中有不同程度表达,以出生后1天小鼠神经视网膜组织为例,PAT3PAT16是其中表达水平最高的。而同一PAT基因在同一发育阶段的不同组织中表达水平存在差异,例如PAT7基因在神经视网膜组织中的表达均明显高于同一发育阶段的晶状体。另外,同一PAT基因在同一组织的不同发育阶段其表达也存在差异,例如PAT16基因在神经视网膜组织中的表达随眼睛发育进程呈明显增高趋势。另一方面,用2-bromopalmitate处理后发现培养的视网膜祖细胞中骨形态发生蛋白受体IABMPRIA)以及视紫质基因(RHO)表达下降,转录因子RAXNEUROD基因表达明显减少,而PAX6SIX3基因表达无明显变化。
结论 多个PAT基因在小鼠眼发育期眼组织中的广泛表达提示其提供的蛋白质棕榈酰化修饰可能是眼睛发育中一项重要的机理。而其中存在组织和发育阶段差异性表达的个别PAT基因可能与眼睛发育存在特异性相关。下一步的实验需要进一步验证其对于特定组织和细胞的发育和分化的影响。

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