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体外培养角膜缘上皮细胞膜片重建眼表后的组织表型及供体细胞的检测
作者:陈鹏  文章来源:山东省眼科研究所  点击数258  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 观察角膜缘干细胞缺乏Limbal Stem Cell Deficiency, LSCD病人进行以羊膜为载体培养的角膜缘上皮细胞膜片移植后眼表的组织表型及供体细胞在眼表的存活情况。
方法 在去上皮羊膜上培养角膜缘上皮细胞,将该膜片用于LSCD病人,共77只眼:眼表化学伤5只眼、热烧伤1只眼、Stevens–Johnson综合症1只眼。提取供体和受体外周血白细胞DNA及膜片移植一段时间后受体眼表组织的DNA,通过短片段重复序列(STR)扩增和毛细管电泳检测眼表组织内是否存在供体细胞。通过免疫组化的方法检测膜片移植后受体眼表组织和角膜上皮的表型。
结果 平均随访时间为角膜缘上皮细胞膜片移植后25个月(3–60个月),DNA分析结果显示从角膜缘上皮细胞膜片移植3个月到60月,在眼表组织内均未检测到供体细胞;眼表血管膜组织K19染色呈阳性,角膜染色显示K3K19P63分别在不同层次的上皮内呈阳性。
结论 以羊膜为载体培养的角膜缘上皮细胞膜片移植手术是一种有效的重建LSCD患者眼表的方法。并且这种疗效的维持并不依赖于一定数量的供体细胞在眼表的存在。角膜缘上皮细胞移植3个月后在眼表中就不复存在。角蛋白标记染色结果显示,受体角膜片上皮细胞的表型与正常角膜缘上皮极为相似。这提示我们需要重新考虑角膜缘上皮细胞移植后免疫抑制剂长期使用的必要性,同时也促使我们进一步研究再生受体角膜上皮的来源问题。

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