目的 改进大鼠晶状体再生模型,并在晶状体再生的不同阶段检测干细胞标记物的表达,证实晶状体干细胞样细胞的存在并结合BrdU标记的方法对其进行定位。 方法 健康成年Wistar大鼠一眼行透明晶体摘除术,术中仅行前囊1/3象限的切开而不行前囊撕除术,术后2小时、1天、3天、1周、2周及1月分别裂隙灯观察及组织学检测晶状体再生情况;取不同时间点晶状体再生组织,提取RNA并反转录,应用荧光定量PCR检测干细胞标记物ABCG2/Nestin/Telomerase/PCNA的表达,对侧未手术眼为正常对照。同时通过免疫组化的方法检测ABCG2及PCNA的表达,确定晶状体干细胞样细胞的定位。部分大鼠术前3天每天两次注射BrdU,最后一次注射后行一眼的晶状体囊外摘除术,术后即刻、1天、3天及1周分别取眼球石蜡包埋后切片,通过免疫组化的方法检测BrdU的表达,确定增殖的细胞所在,辅助定位晶状体干细胞样细胞。 结果 改进的大鼠晶状体再生模型短期内即可再生出新的晶状体组织,且远离前囊切开的地方再生组织透明,排列规则,其过程类似于正常晶状体组织的发育过程。而前囊切开的地方晶状体上皮细胞异常增生,未发生晶状体纤维化改变,但有明显混浊。荧光定量PCR显示术后不同时间点均有干细胞标记物的表达且术后1月表达量明显。免疫组化检测再生晶状体的赤道部及前囊均有ABCG2及PCNA阳性细胞的表达,BrdU免疫组化结果同样证实正常晶状体及再生晶状体的赤道部及前囊均有增殖细胞的存在。 结论 大鼠晶状体摘除术后可以再生出晶状体组织,该过程中干细胞标记物表达逐渐增强。晶状体组织中可能存在干细胞样细胞并在晶状体再生中发挥重要作用。 |