目的 探索简便高效富集人角膜缘上皮祖细胞的方法，为体外构建角膜缘上皮片提供高质量的种子细胞。
方法 无血清培养条件下，采用组织块培养法进行人角膜缘上皮祖细胞的体外扩充培养；当细胞融合达90%时，使用0.25%胰酶/0.02%EDTA消化，DTI(Defined Trypsin Inhibitor)终止消化，以700rpm速度离心5mins收集细胞，制成细胞悬液；依次使用孔径40μm和30μm细胞滤网滤过细胞，以700rpm速度离心5mins，收集滤过细胞，制成细胞悬液；按照5×10⁴/cm²的细胞密度接种于包被IV型胶原蛋白的六孔板中，每次接种5个孔，依据各个孔中所设细胞贴壁时间不同，共分为5组，分别为贴壁5mins组、10mins组、20mins组、40mins组、60mins组，弃去未贴壁细胞，置于37℃，5% CO2培养箱中充分贴壁6 h。2%多聚甲醛固定，采用免疫荧光染色技术检测5组贴壁细胞K3、p63蛋白的表达，并计算阳性细胞比例。
结果 采用40μm和30μm细胞滤网可有效滤过细胞团，收集直径小于30μm的细胞，收集到的细胞约占细胞总数的69.37% ± 11.80%；5个时段的贴壁细胞表达K3的阳性细胞比例在贴壁60mins的细胞孔中最高，在贴壁5mins的细胞孔中最低，表达p63的阳性细胞比例在贴壁60mins的细胞孔中最低，在贴壁10mins的细胞孔中最高，比例为81.29% ± 0.05%，此时分离到的角膜缘上皮祖细胞阳性比例最高。
结论 采用不同孔径滤网滤过和IV型胶原蛋白粘附相结合的方法，可以有效富集人角膜缘上皮祖细胞，为体外构建角膜缘上皮片提供高质量的种子细胞。