目的 研究并比较氨甲酰促红细胞生成素（carbamylated erythropoietin，CEPO）与促红细胞生成素（erythropoietin，EPO）抗糖尿病性视网膜病变中神经成分和血管成分的作用及相关机制。
方法 （1）化学合成法制备CEPO，采用层析、酶切、电泳和硝酸银染色鉴定合成产物。（2）链脲佐菌素60mg/kg腹腔注射以建立大鼠糖尿病模型。建模后2周，分别予以CEPO和EPO各50ug/kg腹腔下注射。干预2周和4周后，采用视网膜电流图（electroretinogram，ERG）评价视网膜功能改善情况。摘除眼球，切片观察视网膜形态，测量视网膜各层厚度变化，神经节细胞计数，TUNEL法检测神经细胞凋亡。（3）采用上述方法同样设置正常大鼠对照组、糖尿病大鼠空白对照组、糖尿病大鼠EPO组和糖尿病大鼠CEPO组。运用Real-time PCR和Western Blotting检测视网膜组织中VEGF在mRNA和蛋白水平的表达情况，运用视网膜血管造影观察血管渗透性的改变。
结果 （1）合成产物分子量较EPO略有增加，经赖氨酸内切酶酶切无分解产物，产物为纯度较高的CEPO。（2）ERG最大反应b波振幅和Ops波振幅在糖尿病大鼠组显著降低（p<0.05），而在糖尿病大鼠CEPO组和糖尿病大鼠EPO组无显著降低（p>0.05）且两组间比较无显著差异（p>0.05）。同正常大鼠对照组比较，糖尿病大鼠视网膜组织厚度变薄、神经节细胞计数减少，视网膜神经细胞TUNEL染色阳性细胞增多，而药物干预2周和4周比较无差异。CEPO和EPO可显著性抑制这些变化（p<0.05），两者作用比较无显著差异（p>0.05）。（3）在mRNA和蛋白水平表达上，VEGF在糖尿病大鼠组与糖尿病大鼠EPO组均较正常大鼠组升高（p<0.05），在糖尿病大鼠CEPO组较糖尿病大鼠EPO组显著降低（p<0.05）；糖尿病大鼠组和糖尿病大鼠EPO组视网膜铺片荧光渗漏和微血管瘤较正常大鼠组明显增多，而糖尿病大鼠CEPO组基本无荧光渗漏和微血管瘤。
结论 CEPO具有与EPO相同的抗DR时DR神经细胞损伤的作用，而无EPO促新生血管形成作用。CEPO可能通过CD131受体发挥其视网膜神经保护作用。 |
