目的 滤过术后瘢痕化是滤过手术失败的主要原因，瘢痕化的发生及发展与多种致纤维化因子的活性密切相关，其中转化生长因子β（transforming growth factor-β，TGF-β）占主要地位。前期我们通过SELEX技术筛选得到靶向TβRⅡ（转化生子因子βⅡ型受体）的核酸适配体，并证明了该适配体对TβRⅡ具有封阻作用。但是核酸适配体在体内存在易被核酸酶降解、作用时效短等缺点，因此本研究在前期实验基础上，使用壳聚糖纳米微粒作为载体，包裹核酸适配体，以期达到对核酸适配体的保护及缓释作用。
方法 通过离子交联法制备出不同N/P比值的核酸适配体-壳聚糖纳米微粒；通过DNase I消化后使用高浓度琼脂糖凝胶电泳，验证壳聚糖对核酸适配体的包裹及保护作用，并找出对核酸适配体保护作用最理想的N/P比值；紫外分光光度仪检测包封率及载药量；Zeta粒径分析仪检测纳米微粒的平均粒径及表面电荷；扫描电镜观察纳米微粒的粒径、分布及形态；体外缓释实验观察壳聚糖纳米微粒对核酸适配体的缓释作用。
结果 1.N/P比值为20及20以上时，壳聚糖纳米微粒能较完全地包裹核酸适配体，并能保护核酸适配体免于被DNase I所降解。2. N/P比值为20的核酸适配体-壳聚糖纳米微粒平均包封率88.9%，平均载药量4.2%。3.Zeta粒径分析仪得出：纳米微粒平均粒径136.2nm，表面电荷24.3mv。4. 扫描电镜观察到球形或不规则形的微粒，达到纳米级别，分布均匀。5.紫外分光光度仪及琼脂糖凝胶电泳对体外缓释实验缓释出的核酸适配体进行分析，均证明缓释效果能达到96h。
结论 使用脱乙酰度90%，平均分子量15W的壳聚糖制成纳米微粒包裹核酸适配体，当N/P比值为20及20以上时，壳聚糖纳米微粒能较完全地包裹核酸适配体，并能保护核酸适配体免于被DNase I所降解。体外缓释实验证明壳聚糖纳米微粒能够缓慢释放核酸适配体达96h。初步证明了壳聚糖纳米微粒对核酸适配体具有保护及缓释作用。 |
