目的 观察吡啡尼酮对体外培养视网膜色素上皮细胞（retinal pigment epithelial，RPE）细胞迁移、分化、增殖的影响，探讨其可能的细胞信号通路机制；
方法 传代培养永生化RPE细胞D407，徕卡生物显微系统下观察吡啡尼酮作用24h后细胞的生长状态；划痕法检测不同浓度（0、0.3、0.5mg/ml）吡啡尼酮作用下RPE细胞迁移能力的变化；检测吡啡尼酮对TGF-β2的诱导作用是否具有抑制作用；MTT法检测不同浓度（0、0.1、0.2、0.3、0.5、1mg/ml）吡啡尼酮作用不同时间（24、48、72h）后OD值变化；RT-PCR法检测吡啡尼酮作用后FN、Snail1、TGFβ1、TGFβ2的基因转录，Western blot法检测FN、α-SMA、CTGF、TGFβ1、TGFβ2、Smad2/3、Smad4蛋白表达的变化；台盼蓝法检测作用浓度范围内的吡啡尼酮对RPE细胞是否有细胞毒性；流式细胞仪检测吡啡尼酮作用后细胞的凋亡情况；
结果 吡啡尼酮作用后RPE细胞迁移速度明显下降；10ng/mlTGFβ2诱导RPE细胞迁移，吡啡尼酮能抑制TGFβ2的诱导作用；吡啡尼酮能抑制RPE细胞生长；0.3、0.5、1.0mg/ml吡啡尼酮作用24h、48h、72h后RPE细胞OD值明显下降，具有统计学意义；吡啡尼酮能下调FN、Snail1、TGFβ1、TGFβ2的mRNA水平明，抑制FN、α-SMA、CTGF、TGFβ1、TGFβ2、Smad2/3、Smad4蛋白表达；不同浓度（0、0.3、0.5、1mg/ml）吡啡尼酮作用24h后各组RPE细胞存活率及早、晚期凋亡率没有统计学差异；
结论 1、吡啡尼酮能抑制RPE细胞迁移，TGFβ2能诱导RPE细胞迁移，而吡啡尼酮能明显抑制TGFβ2的诱导作用；2、吡啡尼酮能抑制RPE细胞Snail1基因转录、α-SMA、CTGF蛋白合成，揭示吡啡尼酮能抑制RPE细胞的分化；3、吡啡尼酮能明显抑制体外培养RPE细胞的生长、增殖及细胞外基质的合成；4、在作用浓度范围内（0～1mg/ml），吡啡尼酮对RPE细胞的抑制作用和其细胞毒性无关；5、吡啡尼酮抑制RPE细胞增殖可能是通过抑制TGFβ1、TGFβ2蛋白和基因的表达，进而抑制TGF-β下游通路（Smad通路）而发挥作用。 |
