目的 应用连锁分析、基因测序的方法，对一个常染色体显性遗传的角膜营养不良家系进行基因筛查及定位，探讨该家系的发病原因。
方法 收集一个中国人Thiel-Behnke蜂窝状角膜营不良家系，共4代28人，其中患者10人，10 岁前即可发病，男女比例1：1，对入选对象进行详细的临床检查。连锁分析：抽取其中18人外周血提取DNA，利用ABI PRISM® Linkage Mapping Set version 2.5试剂盒及针对TGFBI基因自行选择合成的STR 标记，经聚合酶链反应扩增后，通过ABI 3130xl全自动遗传分析仪确定等位基因分型，利用LINKAGE软件进行两点间连锁分析，计算LOD值，并构建单体型。基因序列分析：对所有家系患病成员及正常同胞进行TGFBI基因编码序列分析，包括其全部17个外显子，5’及3’端与外显子拼接的内含子序列。
结果 经连锁分析得出五个STR 标记D5S816~D5S1500的LOD值>3，其中与TGFBI基因相邻的D5S399(θ=0)取得最大值为4.81。单体型分析发现该家系角膜营养不良表型与D5S816~D5S1500等位基因片段存在共分离现象，定位该家系致病基因位于5q31上一4.37cM区间内。在此区间内的候选基因TGFBI与角膜营养不良的发病相关。对TGFBI基因直接测序显示家系中所有患者在TGFBI基因的第2外显子存在杂合性突变，mRNA第370位碱基出现C→T的杂合性碱基改变，导致了野生型基因编码的精氨酸(Arginine，Arg或R)被胱氨酸(Cystine，Cys或C)替代，使密码子R124C发生了突变，并且该突变与疾病表型共分离。
结论 发现了一个常染色体显性遗传的角膜营养不良家系，其致病基因位点定位于5q31上一4.37cM区间内。经序列分析确定该家系角膜营养不良患者均存在TGFBI基因第2外显子的R124C突变。 |
