目的 1．观察不同浓度瓦它尼丁 （Vatalanib）对体外培养大鼠角膜上皮细胞的毒性作用，为动物实验提供浓度依据。 2．分析0.05%，0.1%，1%3种不同浓度Vatalanib对大鼠角膜NaOH碱烧伤模型下新生血管的作用。
方法 1．消化法原代培养大鼠角膜上皮细胞。 0．1％，0．01％，0．001％ ，0．000 l％共4个浓度Vatalanib培养液，在30 min、2h、6h、24 h共4个时间点行MTT检测。每浓度每时间点5孔。2．建立wistar大鼠角膜碱烧伤模型。60只大鼠平均分为5组：A组（生理盐水对照组），B1组（0.05%Vatalanib组），B2组（0.1%Vatalanib组），B3组（1%Vatalanib组），C组（0.1%地塞米松磷酸钠组），各组造模后结膜下给药0.1ml，隔日1次。3．观察期为3、7、14天。检测指标：计算新生血管面积；大鼠角膜行HE染色；免疫荧光染色法检测CD31表达，图片使用Image-Pro Plus软件分析，五个视野的IOD值（累积光密度），的平均值为标本最后的统计量；半定量逆转录-聚合酶链反应检测角膜组织VEGF的表达，β-Actin内参标定，产物电泳图结果使用ImageJ软件分析基因扩增产物灰度值，统计量为实验组条带灰度值与相应β-Actin条带灰度值之比。
结果 1．24小时MTT检测计算B组细胞抑制率4.8%，C组10.3%，D组21.3%，E组33.5%， IC50为70.7mg/ml（7.07%）。2．造模第14天，各组角膜新生血管面积分别为27.3、24.5、18.9、18.4、15.0mm2。统计分析表明： A和C组与余各组， B1与B2、B3组统计量差异具有统计学意义。3．免疫荧光染色结果统计分析表明，14天时，A组与余各组， C组与余各组统计量差异具有统计学意义。4．半定量逆转录-聚合酶链反应结果经统计分析表明， 14天时，A组与余各组， C组与余各组，B1、B2与B3组统计量差异具有统计学意义。
结论 1． MTT实验24小时计算VatalanibIC50为70.7mg/ml（7.07%），Vatalanib对大鼠角膜上皮细胞非常安全。2．Vatalanib对大鼠角膜新生血管生成有抑制作用，与0.1%地塞米松磷酸钠相比效果稍弱。药物抑制新生血管的效果具有浓度依赖性。 |
