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枸杞多糖对视网膜色素上皮细胞多靶点保护作用机制的研究
作者:董卫红  文章来源:山东中医药大学眼科研究所/山东中医药大学附属眼科医院  点击数279  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的 建立蓝光诱导的光损伤模型及猪光感受器外节诱导的脂褐素模型,给予不同浓度枸杞多糖进行干预,探讨枸杞多糖对RPE细胞的保护作用。

方法 (): 1、通过蓝光诱导建立hRPE细胞光损伤模型: 白色冷光源,波长范围为470nm520nm,蓝色滤光片,光照强度(2000±500)LUX蓝光连续照射hRPE细胞12h2实验分组:A(正常RPE细胞)-正常对照组,B(RPE+光照)-光照损伤组,C(RPE+光照+1mg/ml枸杞多糖)D(RPE+光照+0.1mg/ml枸杞多糖)E(RPE+光照+0.01mg/ml枸杞多糖)。倒置相差显微镜下观察细胞形态,并检测细胞凋亡率、线粒体膜电位和线粒体活性氧。()通过猪光感受器外节诱导建立hRPE细胞脂褐素模型,荧光显微镜定性及定量测定hRPE细胞吞噬POS的荧光面积。用流式细胞技术定量检测hRPE细胞内脂褐素自发荧光值。

结果 ()1.成功建立了蓝光损伤模型。倒置相差显微镜下观察A-E组细胞见:A组细胞呈梭形或多边形,单层贴壁生长,细胞边界清楚。B组一些细胞体积缩小,变圆,折光性改变, 细胞周围见透亮圈;细胞核缩小,分裂为多个或出现核边聚;培养液中出现圆形悬浮细胞及细胞碎片C-E组少许细胞积缩小,变圆,折光性改变。2.Annexin V-FITC/PI凋亡:A组凋亡细胞数量最少;B组凋亡细胞数量最多;CE组凋亡细胞数量与B组差异有统计学意义P<0.05C组、D组凋亡细胞数量与A组差异无意义。3.线粒体膜电位检测:A组阳性细胞数量最多;B组阳性细胞数量最少;CE组阳性细胞数量与B组细胞差异有统计学意义;C组、D组阳性细胞数量与A组差异无统计学意义。4.线粒体活性氧检测:A组荧光度最大;CD组与B组差异有统计学意义E组与B组差异无统计学意义。()1 hRPE细胞吞噬猪POS荧光面积:A组空白对照组为0E组最多,CDE组与B组比较差异有统计学意义2流式细胞技术检测hRPE细胞内脂褐素自发荧光值,A组最少,B组最多,C组、D组及E组与B组相比差异有统计学意义E组与A组相比差异无意义。

结论 枸杞多糖能抑制蓝光诱导损伤的hRPE凋亡,增强hRPE细胞线粒体膜电位和线粒体活性氧增强hRPE细胞吞噬POS及清除脂褐素的功能,从抗氧化及抗衰老两方面对hRPE细胞起保护作用

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