目的 建立蓝光诱导的光损伤模型及猪光感受器外节诱导的脂褐素模型,给予不同浓度枸杞多糖进行干预,探讨枸杞多糖对RPE细胞的保护作用。 方法 (一): 1、通过蓝光诱导建立hRPE细胞光损伤模型: 白色冷光源,波长范围为470nm~520nm,蓝色滤光片,光照强度(2000±500)LUX蓝光连续照射hRPE细胞12h。2实验分组:A组(正常RPE细胞)-正常对照组,B组(RPE+光照)-光照损伤组,C组(RPE+光照+1mg/ml枸杞多糖),D组(RPE+光照+0.1mg/ml枸杞多糖),E组(RPE+光照+0.01mg/ml枸杞多糖)。倒置相差显微镜下观察细胞形态,并检测细胞凋亡率、线粒体膜电位和线粒体活性氧。(二)通过猪光感受器外节诱导建立hRPE细胞脂褐素模型,荧光显微镜定性及定量测定hRPE细胞吞噬POS的荧光面积。用流式细胞技术定量检测hRPE细胞内脂褐素自发荧光值。 结果 (一)1.成功建立了蓝光损伤模型。倒置相差显微镜下观察A-E组细胞见:A组细胞呈梭形或多边形,单层贴壁生长,细胞边界清楚。B组一些细胞体积缩小,变圆,折光性改变, 细胞周围见透亮圈;细胞核缩小,分裂为多个或出现核边聚;培养液中出现圆形悬浮细胞及细胞碎片。C-E组少许细胞积缩小,变圆,折光性改变。2.Annexin V-FITC/PI凋亡:A组凋亡细胞数量最少;B组凋亡细胞数量最多;C~E组凋亡细胞数量与B组差异有统计学意义(P<0.05);C组、D组凋亡细胞数量与A组差异无意义。3.线粒体膜电位检测:A组阳性细胞数量最多;B组阳性细胞数量最少;C~E组阳性细胞数量与B组细胞差异有统计学意义;C组、D组阳性细胞数量与A组差异无统计学意义。4.线粒体活性氧检测:A组荧光度最大;C~D组与B组差异有统计学意义;E组与B组差异无统计学意义。(二):1 hRPE细胞吞噬猪POS荧光面积:A组空白对照组为0,E组最多,C、D、E组与B组比较差异有统计学意义。2流式细胞技术检测hRPE细胞内脂褐素自发荧光值,A组最少,B组最多,C组、D组及E组与B组相比差异有统计学意义。E组与A组相比差异无意义。 结论 枸杞多糖能抑制蓝光诱导损伤的hRPE凋亡,增强hRPE细胞线粒体膜电位和线粒体活性氧。增强hRPE细胞吞噬POS及清除脂褐素的功能,从抗氧化及抗衰老两方面对hRPE细胞起保护作用。 |