目的 探讨相差显微镜下体外培养糖性白内障晶状体的上皮细胞、浅层皮质以及前后极“Y”缝的微观结构变化,为动态观察离体白内障模型早期形态变化的提供一种新的方法。 方法 雌性4周龄Wistar大鼠20只,CO2处死后在手术显微镜下,完整摘出晶状体,预培养12h,剔除受损伤混浊的晶状体,获得32只透明晶状体。按随机分组的原则将上述透明的晶状体分为空白对照组和实验组,放入24孔板中孵育。空白对照组:M199培养基+正常浓度葡萄糖培养液(5.56mmol·L-1);实验组:M199培养基+高浓度葡萄糖培养液(55.6mmol·L-1)。分别于0、24、48、72小时观察晶状体,将24孔板置于DMI3000倒置相差显微镜下,利用20´、40´物镜结合PH1环形光圈观察晶状体前囊膜下上皮细胞、浅层皮质及前后极“Y”字缝的形态变化,并用照相方法记录。 结果 培养期间,对照组晶状体保持透明,镜下晶状体上皮细胞、前后极“Y”缝及浅层晶状体纤维清晰可见,无明显改变;实验组晶状体均出现轻度混浊,上皮细胞胞体变大,形态变得不规则,细胞内出现大小囊泡及颗粒沉积,前后极“Y”缝变宽,连接断裂,末端出现球形小体,浅层晶状体纤维排列疏松,大小空泡形成。 结论 相差显微镜主要用于观察活细胞或薄层组织切片,早期白内障晶状体具有良好的透光性,可利用相差显微镜观察晶状体不同层面的显微结构,形态清晰、操作简便,为连续动态观察体外白内障模型的早期变化提供了一种新的方法。 |