目的 眼球组织结构特殊，从眼球壁各层组织到晶状体、玻璃体，软硬程度各不相同，连接性差，如果采用普通的石蜡切片步骤，会造成各层分离，尤其是视网膜的脱离，难以制作出完整的眼球石蜡切片。而且动物标本与人的标本存在一定程度的差异，动物的组织比人的组织柔软，含水量多，在石蜡制片过程中操作不当容易出现组织块变脆，影响切片，因此小鼠的石蜡切片不能完全按照人的石蜡切片程序来进行。我们实验室通过对小鼠石蜡切片制作方法的多次探索，总结出一些特别用于小鼠眼球的石蜡切片技术改进方法。
方法 BALB/c小鼠20只，拉颈处死，无菌条件下手术摘除眼球并做好标记。与普通组织标本不同的是，小鼠眼球石蜡切片的第一步是固定，小鼠眼球离体以后，由于质地太软，不能立即进行取材，否则会造成眼球各部分变形和眼内容物的脱出。所以需要先经过固定液的固定。经过对各种固定液的尝试，我们认为采用冰醋酸、甲醛、生理盐水和75%乙醇按照1:2:7:10的比例混合而成的固定液对于制片效果较好。固定时间为24小时。固定后进行取材。将眼球标本置于水平方位，沿视神经的上方和下方，从眼球后壁向角膜分别剖开。组织脱水采用乙醇脱水：将标本分别经过70%、80%、90%、95%、95%、100%和100%的乙醇，每一步骤脱水1小时，透明采用二甲苯：每步1小时，重复3缸。浸蜡采用熔点为58℃的石蜡，每缸1小时，重复3缸。包埋过程中需要注意的是，浸完蜡的标本可以先放于熔化的石蜡中等待包埋；包埋过程中动作一定要迅速，时间太久石蜡会凝固，导致切片时组织和石蜡的分离。切片我们采用4μm的厚度，经过对烤片时间的摸索，烤片时间太短切片染色时容易脱落，烤片应该为60℃，3~4个小时。
结果 经过我们对小鼠眼球石蜡切片技术方法的一些改进，切片染色效果很好，眼球壁各层次分明，细胞排列整齐，染色颜色鲜艳，特别是不再出现视网膜脱离的现象。
结论 综上所述，我们对小鼠眼球石蜡切片技术方法的一系列改进方法操作简单，易于实现，耗费较小，为今后动物眼球石蜡切片技术的创新和改进提供了一定的依据。 |
