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新生小鼠角膜组织不同种类蛋白提取策略分析
作者:贺司宇  文章来源:河南省眼科研究所  点击数546  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

背景 对新生小鼠角膜进行研究对于理解角膜发育意义重大。然而,新生小鼠角膜组织体积、质量均较小,选择合适的方法对于不同的生物大分子物质进行分析意义重大,尤其是对于不同的蛋白类型选择特异性的提取液进行提取以实现高效率的微量提取意义重大。
目的 分析新生小鼠角膜中不同种类蛋白质的提取方法,尤其是寻找对于不同的膜蛋白,胞内蛋白的提取方案。
方法 采用超声裂解法,冻融裂解法以及研磨法法对出生6天、10天的C57/BL小鼠进行提取,提取所用裂解液分别采用可溶性蛋白与不可溶性蛋白提取液。蛋白提取后进行BCA定量分析提取效率。分别对骨架蛋白GAPDH,膜蛋白K3p63蛋白的表达情况进行Western Blot分析,比较不同的裂解液成分对于不同的蛋白提取效率的差别。
结果 1)在三种不同的蛋白提取方法中微型研磨杵研磨对于蛋白的提取最充分;2NP-40对于K3的提取效率优于可溶性提取液;3)可溶性蛋白提取液对于p63的提取效率优于NP-404)对GAPDH的提取而言两种不同的提取液没有显著差异。
结论 NP-40能够有效的提取新生小鼠角膜组织膜蛋白,可溶性蛋白提取液能够高效的提取小鼠新生小鼠角膜组织中存在于细胞质中的蛋白物质。

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