目的 探讨改良内皮抑素（ES）基因对大鼠角膜新生血管（CNV）中血管内皮生长因子（VEGF）及其血管内皮生长因子受体因子2（Flk-1）表达的影响及作用机制。
方法 102只清洁级SD大鼠按随机数字表法分为对照模型组、pCI空载体组、pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组，每组24只；正常组6只。用浸有1 mol/L NaOH溶液的直径3 mm圆形滤纸快速贴于大鼠角膜中央40 s建立角膜碱烧伤CNV模型，以pCI质粒作为改良前后ES基因的表达载体，每周2次结膜下注射3 μg含质粒的转染液进行基因治疗。每日裂隙灯显微镜下观察角膜水肿及CNV生长情况，计算CNV面积。于碱烧伤后1、4、7、14 d用过量麻醉法处死模型鼠并获取角膜组织，用免疫组织化学法检测CNV内皮细胞中CD34的表达以计算CNV密度，通过逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）及蛋白印迹法（Western blot）分别检测角膜VEGF mRNA及Flk-1在角膜中的表达。
结果 角膜碱烧伤后7~14 d，pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组CNV面积均明显小于pCI空载体组和模型组，CNV密度均明显小于pCI空载体组和模型组，差异均有统计学意义（P<0.05，P<0.01）；pCI-RGDRGD-ES转染组CNV面积均明显小于pCI-ES转染组，CNV密度均明显少于pCI-ES转染组，差异均有统计学意义（P<0.05，P<0.01）。碱烧伤后4 d，pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组大鼠角膜Flk-1蛋白表达水平明显低于正常对照组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；碱烧伤后4 d，pCI-ES转染组、pCI- RGDRGD-ES转染组大鼠角膜VEGF mRNA表达水平明显低于正常对照组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）；pCI-RGDRGD-ES转染组大鼠角膜VEGF mRNA表达水平明显低于pCI-ES转染组大鼠，差异有统计学意义（P<0.05）。
结论 结膜下注射ES基因或RGDRGD-ES基因均能抑制碱烧伤诱导的CNV，但RGDRGD-ES基因对CNV的抑制作用更强，其作用机制为抑制VEGF及其受体Flk-1的表达。 |
