目的 观察KAI1对视网膜母细胞瘤(retinoblastoma, RB)Y79细胞肿瘤转移相关基因表达的影响。
方法 将携带KAI1及EGFP融合基因的慢病毒载体Lenti-MPKG及阴性对照载体转染Y79细胞。应用抗性药物嘌呤霉素结合荧光显微镜下细胞绿色荧光的观察，筛选稳定且高表达KAI1的Y79细胞（Y79-KAI1）及其对照细胞（Y79-KAI1/zero）。应用实时荧光定量RT-PCR、Western blot和细胞免疫荧光方法检测并比较Y79、Y79-KAI1和Y79-KAI1/zero细胞KAI1的表达。应用人肿瘤转移PCR芯片技术分析Y79-KAI1和Y79-KAI1/zero细胞肿瘤转移相关基因的差异表达。
结果 成功建立了稳定且高表达KAI1的Y79-KAI1及其对照细胞Y79-KAI1/zero。实时荧光定量RT-PCR显示Y79-KAI1细胞KAI1基因mRNA表达水平较对照Y79-KAI1/zero及Y79细胞显著增高，三组细胞KAI1基因mRNA相对值分别为183.67 ± 21.20, 1.42 ± 0.55和1.00 ± 0.00（F = 108.74, P = 0.0002）。Western blot检测显示Y79-KAI1细胞KAI1蛋白表达要明显强于Y79和Y79-KAI1/zero细胞。细胞免疫荧光染色显示Y79-KAI1细胞浆中有KAI1蛋白表达，绕细胞核分布，Y79和Y79-KAI1/zero细胞未检测到KAI1蛋白表达。PCR芯片技术共筛选肿瘤转移相关基因84个，其中上调表达2倍以上的共有7个基因，下调表达2倍以上的共有6个基因。
结论 KAI1可导致Y79细胞部分肿瘤转移相关基因的差异表达。这些改变可能与KAI1抑制RB转移有关。 |
