方法 根据各致病微生物的基因组保守序列（镰刀菌的18s rRNA，HSV-1的糖蛋白gG DNA和棘阿米巴18s rRNA）利用在线引物设计软件PrimerExplore 4.0 分别自行设计4条LAMP引物，对提取的镰刀菌，HSV-1和阿米巴基因组DNA在特定体系中进行LAMP反应，LAMP产物经Genefinder荧光染色和琼脂糖凝胶电泳检测。以灭菌水模板作为阴性对照。实验中对最佳扩增温度，LAMP引物的特异性以及LAMP扩增的敏感性分别进行了摸索。

结果Genefinder荧光染色和琼脂糖凝胶电泳都可以对扩增结果进行鉴定。LAMP反应对各病原微生物的最佳扩增温度分别为：镰刀菌和HSV-1为65℃，而阿米巴为63 ℃。所设计的镰刀菌LAMP引物可以特异扩增临床常见致病镰刀菌包括茄病、尖孢和串珠镰刀菌，而对其他真菌没有扩增；病毒和原虫的LAMP引物对HSV-1和阿米巴原虫的扩增都是特异的，不存在交叉反应。LAMP检测镰刀菌的敏感性为1000个拷贝，检测HSV-1的敏感性为500个拷贝，而检测阿米巴的敏感性最好，为10个拷贝。同时还对HSV-1感染小鼠角膜3天的角膜样本进行了LAMP检测，可以特异检测到HSV-1的存在。

结论 LAMP技术可以对感染性角膜病常见病原包括真菌、病毒和阿米巴原虫进行特异、敏感、快速的检测，有望应用到临床对其引发的角膜炎进行早期诊断。