目的 我们在前期研究中已证明了生理浓度的氧自由基ROS参与了角膜上皮细胞的增殖，移行及损伤修复，而NOX是催化ROS生成的酶。本研究目的是调查NOX家族在角膜上皮细胞中的表达，证实NOX参与角膜上皮细胞增殖，移行及损伤修复。
方法 活体共焦显微镜及荧光量化测定去血清培养人角膜上皮细胞在EGF，EGF+DPI（NOX特异性抑制剂）处理30min后不同时间点产生氧自由基ROS（以DCF-DA为荧光染料）水平，并与空白对照相比较。细胞划痕试验比较人角膜上皮细胞在加入EGF，EGF+DPI，DPI后的损伤修复时间及过程，并与空白对照相比较。RT-PCR技术筛选人角膜上皮细胞中NOX各同源异构体NOX1-5及胞浆亚单位p22phox、p47phox、p67phox的mRNA表达，并用Western-blot进一步证实其蛋白表达。
结果 人角膜上皮细胞在5µM EGF处理30min后产生ROS的高峰时间为10min，峰值为对照组的645±67%，而EGF+DPI处理后则产生ROS的量明显降低，仅为对照组的48±23%。细胞划痕后加含EGF培养液培养24Hour后损伤完全愈合，而加EGF+DPI培养液培养24Hour后愈合面积仅占损伤总面积的46±13%，与对照组相比（52±11%）无明显差异，而单纯加DPI培养液培养24Hour损伤无愈合迹象。RT-PCR结果显示角膜上皮细胞表达 NOX2，NOX4和NOX5 mRNA和胞浆亚单位p22phox，p47phox和p67phox mRNA，而不表达NOX1和NOX3 mRNA。Western-blot结果显示角膜上皮细胞表达NOX2，NOX4，NOX5蛋白，以及胞浆亚单位p22phox和p67phox蛋白，而未检测到p47phox蛋白。
结论 NOX催化角膜上皮细胞产生ROS，具有促进角膜上皮增殖，移行及损伤修复作用；角膜上皮细胞表达NOX2，NOX4，NOX5和胞浆亚单位p22phox，p67phox，不表达NOX1，NOX3和p47phox。因NOX2活性必须依赖p47phox，可排除NOX2在角膜上皮损伤修复中的作用，进一步采用基因敲除的方法证实NOX4和NOX5在角膜上皮中的作用是需要的。