目的 利用Poloxamer在特定浓度下的温度敏感性(即低温为液态,温度上升后可转化为高粘滞性凝胶),采用基质内注射LPS温控凝胶法对传统的造模方法做出改良,建立一种稳定、可靠、持久的角膜基质炎动物模型。 方法 利用Poloxamer配制LPS温控凝胶与传统的LPS水溶液作对比,进行兔角膜基质内注射,探讨、评分炎症的各项指标,对此方法建立的角膜基质炎动物模型做出评价。成年雄性新西兰大白兔随机分为2组,采用29G微量注射器进行兔右眼角膜中央浅基质层内注射0.02%LPS水溶液或含Poloxamer的0.02% LPS凝胶,均为20ul,以注射区微隆起、角膜基质局限性变白作为注射成功标志;水溶液组为对照组,凝胶组为实验组;注射后24h、3d、7d、14d为观察点。于各时间点在手术显微镜下角膜照相,根据炎症浸润及新生血管情况按统一标准作出评分;其次在各时间点每组随机选取2只家兔处死后取角膜组织固定、冰冻切片后行常规HE染色,高倍镜视野下做炎性细胞计数,并以NF-KB(核转录因子KB)和MIP-1(巨噬细胞炎性蛋白)为检测指标进行免疫荧光染色,IPP6.0图像分析软件计算其阳性蛋白平均光密度值。各组指标做SPSS统计学分析,P<0.05有显著性差异。 结果 实验组炎症反应明显强于对照组,造模成功率100%,对照组80%;对照组3d后炎症反应迅速消失,实验组3d后炎症反应存在并持续加重,7d可见明显的炎性浸润。在24h、3d时两组模型角膜组织显微镜照相评分、HE染色炎性细胞计数以及免疫荧光半定量分析无显著性差异(P>0.05);在7d、14d两组上述三项指标对比均有显著性差异(P<0.05),实验组明显高于对照组。 结论 利用LPS温控凝胶取代传统的水溶液进行角膜基质内注射,对传统的角膜基质炎造模方法改良,可诱导出更稳定、严重、持久的角膜基质炎动物模型,有利于今后学者对其病理机制的研究、相关临床药物药效及副作用的长期观察,为今后的科学研究奠定了良好的基础。 |