目的 研究人葡萄膜黑色素瘤（Uveal Melanoma，UM）细胞系中骨桥蛋白的表达情况，进行细胞功能实验，分析骨桥蛋白（Osteopontin，OPN）的表达量高低对葡萄膜黑色素瘤细胞增殖能力以及侵袭能力的影响。
方法 体外培养人高侵袭性葡萄膜黑色素瘤细胞系C918和低侵袭性UM细胞系OCM-1A，运用Q-PCR技术检测两株细胞系OPN mRNA表达量；构建OPN沉默慢病毒表达载体，转染人UM细胞系C918，设置OPN沉默慢病毒表达组（KD组）、阴性对照组（NC组）以及空白对照组（CON组），运用Q-PCR以及Western Blot法进行表达验证试验；运用MTT法检测OPN沉默慢病毒表达载体转染UM细胞系C918前后UM细胞增殖能力的变化；运用Transwell实验检测OPN沉默慢病毒表达载体转染UM细胞系C918前后UM细胞侵袭能力的变化。
结果 人高侵袭性UM系C918和低侵袭性UM细胞系中OPN mRNA表达量较高，相对表达量分别为0.91±0.03和0.08±0.01,构建OPN沉默慢病毒表达载体，转染人UM细胞系C918，运用Q-PCR以及Western Blot法进行表达验证试验，结果显示OPN mRNA表达含量敲除效果均为90%以上，蛋白表达敲除效果显著。MTT法检测OPN沉默慢病毒表达载体转染前后细胞系C918前5天KD组OD490值较NC及CON组显著下降，差异具有统计学意义（P＜0.05）。Transwell法检测OPN沉默慢病毒表达载体转染前后细胞系C918细胞侵袭率KD组较NC组以及CON组侵袭率下降，分别为2.055±0.005、2.602±0.003、2.614±0.002；KD组分别与NC组及CON组相比，两者差异皆具有统计学意义（P＜0.05）。
结论 骨桥蛋白在高侵袭潜能UM细胞系中表达增高；骨桥蛋白在UM细胞系中表达越高，肿瘤细胞的增殖能力以及侵袭能力越高，提示了骨桥蛋白在促进UM发生发展以及肿瘤发生浸润侵袭的过程中可能起到了重要作用。 |
