目的 用转人CTLA-4基因广西巴马猪角膜行SD大鼠异种角膜移植手术，观察异种角膜移植后排斥反应性，探讨用于人异种角膜移植的可能性。
方法 1、提取猪角膜组织中RNA，检测CTLA-4基因表达情况。2、猪-大鼠穿透型角膜移植。实验组使用转人CTLA-4基因广西巴马猪角膜作为供体，对照组用野生型普通巴马猪角膜作为供体，受体均为SD雌性大鼠。3、术后定期进行临床观察，RI评分。定期处死大鼠用Western Blot方法检测角膜中CTLA-4Ig表达量。ELISA方法检测角膜中各种细胞因子的含量。免疫组织化学方法检测各种细胞浸润情况。
结果 1、Real-Time PCR结果显示，猪角膜组织、睫状肌和虹膜中均有人CTLA-4核酸表达。Western blot结果显示，异种移植后，随着时间的延长，人CTLA-4Ig在角膜植片中含量逐渐减低。2、临床观察结果显示，实验组术后第7±3.5天开始出现排斥反应，对照组术后5±2.5天开始出现排斥反应。3、实验组和对照组角膜组织内细胞因子含量在第5天开始逐渐升高，第12天左右达到高峰，一个月后逐渐趋于正常。4、移植术后角膜组织病理学检查结果表明，实验组和对照组在猪-鼠角膜移植后第3天，供-受体角膜均已长为一体，愈合良好，基质层内可见少量炎症细胞浸润。移植后第14天，手术完全愈合，手术瘢痕清晰可见。术后第36天，移植后角膜生长正常，角膜透明，无炎症水肿和新生血管长入。
结论 1. 转人CTLA-4基因猪-大鼠异种角膜移植术后联合应用FK506抗免疫排斥反应治疗1个月，然后停止FK506治疗，仍然可使70%以上的大鼠长期保持角膜透明度3个月以上（部分大鼠角膜出现新生血管长入）。2. 实验组术后不用任何抗免疫排斥药物治疗，角膜植片存活率可维持17±3.5天；对照组角膜植片存活率可维持14±3.5天。3. 转人CTLA-4基因猪角膜有望用于作为人角膜移植的替代品。 |
