目的 眼压升高是青光眼的主要危险因素，与小梁网细胞出现氧化应激密切相关。p38MAPK途径在细胞的氧化应激损伤中发挥重要作用，可能参与了小梁网细胞的氧化应激过程。本研究旨在探索p38MAPK途径上游的MKK6沉默表达对正常人及青光眼小梁网细胞氧化损伤修复的影响。
方法 构建针对p38MAPK上游激酶MKK6的shRNA干扰载体，并将其转染青光眼小梁网细胞（GTM）和正常小梁网细胞（HTM），形成MKK6负表达的细胞组，以未转染干扰载体的GTM和HTM为对照组，用PT-PCR和western blot检测各组细胞中MKK6的表达水平变化；以H₂O₂处理小梁网细胞2小时后，用彗星电泳和γ- H2AX蛋白western blot检测各组细胞氧化损伤情况。
结果 MKK6的shRNA干扰载体，可成功转染青光眼小梁网细胞（GTM）和正常小梁网细胞（HTM）内。RT-PCR的结果显示，GTM细胞的MKK6水平较HTM细胞高30%；MKK6沉默表达后，GTM细胞和HTM细胞的MKK6水平均降低，分别为63%和71%。Western blot的结果显示，GTM细胞的MKK6水平较HTM细胞高23%；MKK6沉默表达后，GTM细胞和HTM细胞的MKK6水平均降低分别为55%和60%。对空白对照组和H₂O₂处理2小时的各组小梁网细胞进行彗星电泳，在空白对照组中，HTM-MKK6⁺组、HTM-MKK^-组、GTM-MKK6⁺组、GTM-MKK^-组出现彗尾的细胞数分别为19%、7%、24%和16%；H₂O₂处理2小时后，HTM-MKK6⁺组、HTM-MKK^-组、GTM-MKK6⁺组、GTM-MKK^-组出现彗尾的细胞数分别为69%、56%、92%和73%。对H₂O₂处理2小时的各组小梁网细胞进行γ- H2AX蛋白western blot检测， HTM-MKK^-组和GTM-MKK^-组中γ- H2AX蛋白表达水平分别较HTM-MKK6⁺组和GTM-MKK6⁺组下降27.4%和47.7%。
结论 青光眼小梁网细胞中，p38MAPK通路的活化水平比正常小梁网细胞高，DNA损伤程度较正常小梁网细胞重。MKK6沉默可增强小梁网细胞对氧化应激的耐受，使DNA损伤程度减轻；青光眼小梁网细胞MKK6沉默，其抗氧化损伤能力可提高至逼近正常细胞的水平。