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PB转座子介导的外源性Rb基因在视网膜母细胞瘤细胞的表达
作者:庄菁  文章来源:中山大学中山眼科中心  点击数388  更新时间:2012/9/13  文章录入:毛进  责任编辑:毛进

目的  构建piggyBac 转座子调节的外源性Rb基因的表达系统,转染人视网膜母细胞瘤细胞SO-RB50,探讨piggyBac转座子介导的外源性Rb基因的转染效率及其对视网膜母细胞瘤细胞的抑制作用。

方法  通过RT-PCR技术扩增Rb基因编码区Rb cDNA,定向插入到载体pPiggyBac,获得PiggyBac调节的Rb表达质粒pPiggyBac-Rb通过单独转染或合并pPiggyBac-helper转染 SO-RB50细胞,采用考马斯亮蓝染色、荧光定量PCR以及免疫荧光实验检测piggyBac转座子介导的目的基因与宿主细胞基因组的整合效率;通过MTT实验证明通过piggyBac转座子转染的外源性Rb基因对细胞活性产生的影响。

结果  piggyBac转座子系统的转染效率最高(P0.05),经荧光定量PCR及免疫荧光实验证明其介导的目的基因Rb与宿主SO-RB50细胞基因组整合效率最高且可在细胞中长期稳定表达,并且通过MTT实验证明经其所介导的外源性Rb基因表达对细胞活性影响最为显著(P0.05)。

结论  piggyBac转座子介导的外源性Rb基因可对SO-RB50细胞活性产生长期影响,提示piggyBac转座子有可能成为视网膜母细胞瘤基因治疗的安全有效载体。

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