目的 观察大鼠视神经从球后到视交叉前紧密连接膜蛋白Claudin-5、Occludin在冰片的作用下分布及表达的变化,探讨冰片开放血-视神经屏障的可能机制。 方法 Wistar大鼠随机分为冰片溶媒灌胃组、等体积溶媒灌胃空白对照组。每组在灌胃前及灌胃后30min、1h、2h、4h、8h每个时间点分别取双侧视神经从球后到视交叉前,行Claudin-5、Occludin的免疫荧光染色、Western blot及RT-PCR(Reverse transcription polymerase chain reaction)检测和评价。 结果 冰片灌胃组免疫荧光染色显示:Claudin-5在冰片灌胃30min后开始由细胞膜向细胞质转移并在1h时达到高峰,Occludin亦于此时间段内少量向细胞质内移动;4h时胞质内两种荧光蛋白颗粒开始减退;8h后恢复成正常的荧光形态。而对照组溶媒灌胃后各时间点未见明显的荧光蛋白颗粒的移动及重新分布。两组的RT-PCR结果均显示Claudin-5和Occludin的mRNA表达在灌胃前及灌胃后8h内变化无显著性差异(F值分别为0.925、0.186, P均>0.05)。Western结果亦显示两组在灌胃前及灌胃后的8h内,Claudin-5及Occludin的蛋白表达变化无显著性差异(F值分别为0.248、0.122, P均>0.05)。 结论 冰片干预下血-视神经屏障的Claudin-5与Occludin发生重新分布并呈可逆性。Claudin-5可能在冰片开放屏障过程中发挥重要作用。 |