目的 15-脂氧合酶-1在新生血管的调控过程中发挥重要作用，但其机制存在争议。本研究的目的旨在探讨15-脂氧合酶-1是否可以抑制视网膜微血管内皮细胞的增生以及相关机制。
方法 原代视网膜微血管内皮细胞取自C57/BL6J小鼠视网膜,第3代细胞用于FITC-CD31鉴定。视网膜微血管内皮细胞的缺氧模型用厌氧袋构建，通过血气分析进行评估。实验分为四组：常氧组，缺氧组，缺氧转染15-LOX-1组，缺氧转染GFP组。观察时间设为12、24、48、72h。转染效率通过荧光显微镜观察。 CCK-8法检测细胞增殖。各组细胞不同时间点15-LOX-1, VEGF-A, VEGFR-2, eNOs， PPAR-r mRNA及蛋白水平通过实时定量RT-PCR及Western blot检测。
结果 血气分析结果显示细胞在厌氧袋中培养时间超过2h，细胞培养液Po2低于5.6 kPa，Pco2和pH无明显变化。荧光显微镜观察视网膜微血管内皮细胞可被15-脂氧合酶-1腺病毒复合体高效率转染。CCK-8结果显示缺氧组各时间点的视网膜微血管内皮细胞增殖能力高于常氧组。在缺氧条件下，15-脂氧合酶-1组细胞增殖率明显被抑制。实时定量RT-PCR结果显示缺氧组VEGF-A, VEGF-R2 ,eNOs的mRNA水平明显高于常氧组(p<0.01)；但缺氧组15-LOX-1, PPAR-r的mRNA水平却明显低于常氧组(p<0.01)。缺氧转染15-脂氧合酶-1组VEGF-A, VEGF-R2，eNOs的mRNA水平明显低于缺氧组(p<0.01)；但其15-LOX-1, PPAR-r的mRNA水平却明显高于缺氧组(p<0.01)。缺氧转染GFP对照组与缺氧组之间VEGF-A, VEGF-R2，eNOs，15-LOX-1和PPAR-r的mRNA水平无统计学差异(p>0.05)。Western blot结果显示蛋白水平的变化和mRNA的变化相一致。
结论 我们的研究显示15-脂氧合酶-1和PPAR-r在视网膜血管形成过程中起负性调节作用。视网膜微血管内皮细胞过表达15-脂氧合酶-1通过抑制缺氧导致的VEGF家族的上调，从而抑制视网膜新生血管的形成。同时PPAR-r作为15-脂氧合酶-1的配体，结合VEGFR2是15-脂氧合酶-1抑制了缺氧导致的视网膜新生血管的另一机制。 |
