目的 研究解偶联蛋白2(UCP2)在视网膜色素上皮细胞中的表达。 方法 原代培养不同年龄人视网膜色素上皮细胞(9岁, 52岁, 62岁, 76岁 ),分离纯化,应用 RPE-65免疫荧光检测鉴定原代培养的RPE细胞。相差显微镜观察各组细胞的形态。取原代培养的第6~8代细胞进行试验研究,应用RT-PCR检测UCP2在各组RPE细胞内mRNA的水平;应用激光共聚焦显微镜技术检测UCP2在不同年龄供体的视网膜色素上皮细胞内的荧光强度,并作半定量分析;流式细胞仪技术进一步定量检测UCP2的表达。 结果 原代培养的细胞均表达RPE特异性抗体RPE-65。相差显微镜显示原代培养的RPE细胞核仁清,包浆亮,边界清,供体为9岁及52岁的RPE细胞形态略程多边形,而供体为62岁及76岁的RPE细胞形态略呈梭型。RT-PCR示UCP2的mRNA水平随着供体年龄的增加而下降,激光共聚焦显微镜及流式细胞仪技术均显示UCP2蛋白的表达也随着供体年龄的增加而降低。 结论 初步提示解偶联蛋白2(UCP2)在视网膜色素上皮细胞老化的过程中起着重要的作用。 |