目的  采用共聚焦荧光法定量检测胶原交联手术前后角膜中核黄素浓度的变化，为制定安全有效的核黄素实施方案提供依据。

方法  本实验分为三部分进行。第一部分实验（I），随机将30只新鲜兔眼分为10组，全部去除角膜上皮并滴加0.1%核黄素溶液，分别在滴加0、1、2、4、6、8、10、20、30、40分钟时迅速置于液氮中。第二部分实验（II），随机将6只兔分为2组，分别对右眼进行去上皮的标准交联手术（CXL）和不去上皮的改良交联手术（C3-R），左眼作为对照组，不做交联照射，术后全部迅速摘取眼球置于液氮中。第三部分（III）实验的分组手术方法和第二部分相同，只是在手术结束24小时后摘取眼球。以上眼球角膜制成冰冻切片，并用共聚焦显微镜观察，Image-Pro Plus 6.0软件分析核黄素荧光强度和面积。

结果  在实验I中，去上皮角膜中的核黄素浓度在前6分钟内随滴加时间的延长呈非线性增加，并在6分钟后趋于稳定。在实验II中，CXL手术眼的角膜核黄素浓度较C3-R增高（P=.000）。在实验III中，CXL手术眼的角膜核黄素浓度下降幅度较C3-R增大（P=.000）。

结论  共聚焦荧光法可以直观、定量地分析胶原交联手术前后角膜中核黄素浓度的变化。结果提示，CXL术前角膜中核黄素含量高，术后核黄素消除迅速，因此CXL交联效果和安全性优于C3-R。CXL术前滴加0.1%核黄素溶液6分钟即可使角膜中的核黄素达到饱和。