目的  建立一种新型的角膜缘上皮组织保存方法。

方法  尸源角膜缘组织在4℃以浸没和空气暴露方式在Optisol中期保存液保存不同时间（0，2，4，6，8天）。HE和E-Cadherin免疫荧光染色检测角膜上皮的形态学改变；TUNEL染色法检测角膜缘组织凋亡细胞的数量变化；克隆培养结合结晶紫染色检测保存不同时间的角膜缘上皮细胞的克隆形成率（CFE）；K14、p63和Ki67免荧光染色检测角膜上皮干细胞的数量和状态变化；K12、K10和Pax6免疫组织化学染色检测保存过程中角膜上皮的分化状态；将低温空气暴露保存4，6，8天的角膜缘组织分别移植给3名角膜缘干细胞缺损患者，在术前以及术后1周和1月通过裂隙灯观察患者角膜上皮生长状况。

结果  HE染色显示浸没保存2天上皮即开始脱落破碎，时间延长破碎程度逐渐加重，而空气暴露条件下上皮结构始终保持完整。E-Cadherin免疫荧光染色显示浸没保存过程中，其表达水平不断降低，而低温空气暴露过程表达水平无明显变化。TUNEL染色表明浸没保存过程中上皮和基质中凋亡细胞逐渐增多，而空气暴露条件下仅8天的上皮中见少量凋亡细胞。克隆形成率检测表明，浸没保存时间延长CFE逐渐下降，而低温空气暴露保存不同时间的上皮组织CFE无显著差异。K14、p63和Ki67免荧光染色表明低温空气暴露条件下三种干细胞标记物表达无明显改变。K12、K10和Pax6免疫组织化学染色表明低温空气暴露条件下K12和Pax6表达无明显改变，整个过程无K10染色。裂隙灯结合荧光素染色表明低温空气暴露保存的组织术后1周至1月愈合良好，无明显上皮缺损。

结论  低温空气暴露可保持角膜缘上皮结构完整，并维持前体细胞的低分化水平和增殖能力，还不引发明显的细胞凋亡和异常分化，是一种潜在的可应用于临床的角膜缘上皮组织保存方法。