目的 观察水蛭(Hirudo)提取液对体外培养的牛晶状体上皮细胞(lens epithelial cell,LEC)生长及在人工晶状体(intraocular lens,IOL)表面黏附生长的影响,探讨水蛭用于防治后发性白内障的可能性。
方法 采用植块培养法,以牛晶状体前囊膜进行牛LEC的体外培养,并利用形态学观察和体外培养LEC特异性的“晶状体小体”(lens-like spherules)进行细胞鉴定;以水提醇沉法制备水蛭提取液;传代的牛LEC调整细胞密度为0.5×105/ml,接种于96孔培养板中,培养48h后,加入等比组距的不同浓度水蛭提取液,培养24h、72h后,分别观察LEC生长情况,以MTT法测定OD值,并根据克贝尔法(Kärber method),求出半效抑制量(ID50);灭菌后2%琼脂平铺于24孔培养板中,将PMMA材质的IOL凸面朝下粘附于琼脂表面,传代牛LEC调整细胞密度为0.5×105/ml,接种于24孔培养板,并分别加入水蛭提取液高剂量(ID50量)、低剂量(1/10ID50量)培养24h后,以MTT法测定OD值,与空白对照组比较,观察IOL表面LEC的黏附生长抑制情况。
结果 水蛭水提醇沉提取液抑制体外培养牛LEC生长的24h、72hID50分别为31.85mg/ml、30.69mg/ml;水蛭水提醇沉提取液高、低剂量对体外培养牛LEC在IOL表面黏附生长抑制率分别为87.30%、65.08%,与空白对照组比较,水蛭提取液对LEC在IOL表面黏附生长有明显抑制作用(P<0.01)。
结论 水蛭水提醇沉液能抑制体外培养的LEC生长及在IOL表面的黏附生长,实验为水蛭提取液用于防治后发性白内障提供了实验依据。 |