【目的】1. 建立离体H2O2诱导的鼠白内障模型。2. 观察鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞NF-κB的表达及PDTC对其的抑制作用。3. 观察鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞的凋亡及PDTC对其的抑制作用。
【方法】1. 28只大鼠晶状体离体培养6小时后,取其中50只透明晶状体随机分为H2O2组和对照组,建立离体鼠白内障模型,在3h、6h、12h、24h、48h五个不同时相进行观察。用Adobe Photoshop 6.0RGB模式分析晶状体混浊程度。2. 70只大鼠晶状体离体培养6小时后,取其中125只透明晶状体随机分为H2O2组、对照组和5个不同浓度梯度 (5×10-1mmol/l−5×10-5 mmol/l)的PDTC处理组。分别在3h、6h、12h、24h、48h五个不同时相观察。PDTC处理组培养24小时。3. 用免疫组织化学方法检测各组晶状体上皮细胞NF-κB的表达,观察NF
-κB表达与过氧化氢作用时相的关系及PDTC对其的抑制作用。4.用TUNEL方法检测各组晶状体上皮细胞的凋亡,观察PDTC对它的抑制作用。
【结果】1. H2O2组随时限延长,晶状体混浊度逐渐增加。2. H2O2组晶状体上皮细胞NF-κB随作用时间延长表达逐渐增多,24小时达高峰。对照组无显著变化。3. H2O2组晶状体上皮细胞凋亡数量随作用时间延长逐渐增多,48小时大部分凋亡。4. 不同浓度的PDTC处理组除10-5mmol/lNF-κB阳性表达率与H2O2组比较无统计学意义(P>0.05)外,其余各浓度组与H2O2组、对照组两两比较均有统计学差异。5. 不同浓度的PDTC处理组除10-4、10-5mmol/lNF-κB晶状体上皮细胞凋亡发生率与H2O2组比较无统计学意义(p>0.05)外,其余各浓度组与H2O2组、对照组两两比较均有统计学差异。
【结论】1. H2O2可诱导建立离体鼠白内障模型。2. Photoshop 6.0RGB模式提供了白内障混浊程度的量化指标。3. NF-κB的表达增强参与了H2O2诱导鼠白内障的形成过程,PDTC可以有效抑制 NF-κB的表达,并呈一定程度的剂量依赖性。4. PDTC可以有效抑制晶状体上皮细胞的凋亡,延缓实验性晶状体混浊的发生。5. H2O2诱导的鼠白内障形成过程中晶状体上皮细胞NF-κB表达增强和细胞凋亡之间存在密切的关系,前者可能介导了氧化刺激与晶状体上皮细胞凋亡的中间环节。
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