| 目的 探所一种有效的体外分离、培养大鼠视网膜色素上皮（retinal pigment epithelium，RPE）细胞的方法，建立大鼠RPE细胞体外培养模式，为下一步应用转基因技术体外培养稳定表达人Endostatin的RPE细胞做准备。方法 采用两布酶分层消化法分离获取大鼠RPE细胞；第一步（胶原酶＋透明质酸钠）用于松解视网膜神经上皮层及脉络膜层与RPE细胞之间的接连；第二步（胰蛋白酶）用于离散RPE细胞，制成细胞悬液。F12培养液培养，细胞近融合状态时传代；贴壁率、培养成功率、生长曲线、细胞分离时间为细胞生存活力及增殖状态观察指标，光镜、角蛋白免疫组化用于形态学鉴别及细胞来源鉴定，扫描电镜和透射电镜观察其超微结构；结果 用此方法能获取较纯的大鼠RPE细胞，细胞收获量多，在体外生长旺盛，达到融合的时间较短。原代培养的RPE细胞呈多角形含大量色素，传代细胞呈棱形。电镜显示；胞浆内含黑色素颗粒及各种细胞器；结论 两步酶分层消化法是分离培养体外大鼠RPE细胞的理想方法，培养的大量细胞可用于RPE的体外实验研究
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