目的 观察器官培养角膜保存法保存角膜活性的效果,探讨该方法临床应用的可行性。
方法 猪角膜54只,分两组。实验组30只。对照组24只。实验组用31℃器官培养角膜保存法保存角膜,每6只角膜分别保存3, 7, 14, 21天。6只角膜于培养保存14天后移入含5%葡聚糖500(右旋糖酐,分子量50000)的培养液(称运输液)中培养保存3天。保存前测角膜厚度,观察内皮细胞形态,内皮细胞计数,台盼兰染色。保存后不同时间取出角膜观察相同内容和茜素红染色。对照组用K-液保存,保存时间和观察项目同实验组。2组于保存后3天、7天、14天、21天随机取1只角膜,透射电镜观察角膜内皮。在取出角膜前从所有保存瓶抽取保存液样本做细菌和真菌的培养。
兔角膜28只,分为两组,实验组16只眼,对照组12只眼。实验组用31℃器官培养保存,对照组用k-液4℃保存。两组中,每4只角膜分别保存3,7,14天。实验组4只角膜保存4天后移入运输液中培养3天。保存前测角膜厚度,做内皮细胞形态学检查和台盼兰染色。保存后不同时间做相同检查和茜素红染色。污染监测方法同猪角膜。
临床应用器官培养保存1周的角膜行穿透性角膜移植术1例。
结果 猪角膜保存后1周,实验组与对照组内皮细胞形态学变化及活性状况有明显不同。保存后7,14,21天,实验组角膜内皮细胞活性率明显高于对照组,有显著性统计学差异。7天后实验组与对照组角膜内皮细胞密度和丢失率有显著性差异。角膜厚度两组7天后有显著性差异。运输液培养保存3天后角膜厚度明显下降。内皮细胞活性无明显损害。透射电子显微镜检查2组在保存1周后角膜内皮细胞超微结构改变有明显区别,实验组维持内皮细胞超微结构完整性的时间长于对照组。
兔角膜实验组和对照组内皮细胞形态、活性率1周后有显著性差异。2组角膜厚度有显著性差异。
污染率 实验组10.4%,对照组8.3%,无显著性差异。
穿透性角膜移植术临床病例随访2年,角膜移植片基本透明。
结论 器官培养保存角膜的效果确切,活性保存时间明显长于K-液保存。根据我院的条件,经过进一步研究探索有望将该方法用于临床。 |