| 目的 研究深低温保存后角膜缘区上皮细胞的活性，为采用深低温保存的角膜组织行带角膜缘的全角膜移植手术提供理论依据。探讨对部分穿透性角膜移植手术后剩余的角膜缘材料加以保存和利用的可行性，为建立角膜缘组织库奠定基础。
方法 1）采用胰蛋白酶对新鲜及深低温保存4个月的角膜缘上皮进行消化，对消化下来的细胞进行台盼蓝染色鉴定细胞活力。2）分别对新鲜及保存4个月角膜缘上皮细胞进行培养。比较两者原代细胞培养成功率，原代细胞贴壁生长时间，融合时间。3）细胞传代后，采用AE5单克隆抗体对细胞性质进行鉴定，采用MTT法测定细胞生长曲线，采用流式细胞仪分析传代细胞的细胞周期及凋亡细胞所占比例，采用Brdu掺入法对传代细胞的增殖状况进行评价。
结果 1）新鲜角膜缘上皮细胞其死亡细胞所占比例约为9.0±0.89%，深低温保存4个月角膜缘上皮细胞死亡细胞所占比例约为17.00±1.79%，两者比较有显著性差异。2）新鲜角膜缘组织原位培养成功率为61.8%，保存4个月角膜缘组织原位培养成功率为35.3%，两者比较有显著性差异。3）新鲜角膜缘上皮细胞原代培养融合时间约7.67±0.58日，保存4个月角膜缘上皮细胞原代培养融合时间约为14.08±0.79日，两者比较有显著性差异。4）新鲜及保存4个月角膜缘上皮细胞传代培养其贴壁时间，细胞生长曲线，细胞周期及Brdu标记细胞所占比例没有显著性差异。
结论1.深低温保存的角膜缘上皮细胞在复温后，由于冷冻溶解损伤，存在部分细胞死亡。2.存活的深低温保存的角膜缘上皮细胞在复温初期由于“冷冻休克期”的存在等原因，功能受到一定抑制，但当给予适当的外部条件时，这些细胞可以恢复正常的增殖活性，处于正常的细胞周期。3.液氮深低温保存会造成角膜缘上皮组织凋亡细胞比例有所增加。4.虽然死亡细胞客观存在,但深低温保存的角膜缘上皮细胞大部分保持了良好的活性（包括其中较原始的细胞），适于进行角膜缘移植手术，推荐为一项眼库技术。
关键词：角膜缘 深低温保存
|
