目的:体外培养人眶成纤维细胞,以培养的眶成纤维细胞为研究对象,观察己酮可可碱对眶成纤维细胞增殖及分泌透明质酸的作用。
方法:①采用组织块法培养眶成纤维细胞,观察细胞的生长状况、HE染色观察其形态学特点,免疫组化染色鉴定细胞来源。②将培养的细胞接种于细胞培养板中,随机分组,设空白对照组及不同浓度(0.001、0.01、0.1、0.5、1mg/ml)PTX组,作用24、48、72小时后,观察细胞形态的变化,应用MTT比色法、放射免疫分析法观察不同浓度PTX对眶成纤细胞增殖、分泌透明质酸的作用。
结果:①体外培养的眶成纤维细胞生长良好,传代稳定。免疫组化鉴定波形蛋白阳性。②不同浓度(0.001~1mg/ml)的PTX作用于眶成纤维细胞24、48、72小时,均可不同程度地抑制细胞的增殖。其中高浓度组(0.1、0.5、1mg/ml)作用各时间点对细胞的抑制作用与对照组比较,都有显著的差异性(p<0.05)。PTX对眶成纤维细胞的抑制作用呈时间依赖性和剂量依赖性。③PTX在较低浓度(0.001、0.01mg/ml)作用于眶成纤维细胞24小时后,上清液中HA含量与对照组相比两者之间差异无统计学意义(p>0.05)。当浓度增加到0.5、1mg/ml时各作用时间,均明显抑制细胞分泌HA,与对照组比较差异性具有统计学意义(p<0.05)。PTX对细胞分泌HA的抑制作用具有剂量依赖性。
结论:①本实验成功地培养了眶成纤维细胞,提供了实验模型②己酮可可碱可以抑制眶成纤维细胞的增殖及透明质酸的分泌,并且具有剂量依赖性和时间依赖性,为己酮可可碱的临床应用提供的理论依据。
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