| 目的 探讨应用重组腺伴随病毒载体介导的脑源性生长因子基因（rAAV-BDNF）能否对体外培养的鼠视网膜神经节细胞（RGCs）进行转染，检测外源性BDNF基因在细胞内转录和翻译水平的表达情况，并判断rAAV-BDNF转染后对RGCs生长活性和凋亡的影响。
方法 1. 应用rAAV-BDNF对体外培养2天的RGCs进行转染，MOI＝105，继续培养7天。采用Trizol一步法提取转染细胞的总RNA。根据基因库中BDNF序列和AAV载体基因设计特异性引物，应用RT-PCR技术对外源性BDNF基因在RGCs细胞中mRNA水平的表达进行检测。
2. 分别在rAAV-BDNF转染7天和14天后收集细胞培养液，同时收集未转染细胞的培养液。应用ELISA方法对每组培养液中的BDNF含量进行检测。
3. 分别在转染后3天、6天和9天时，对rAAV-BDNF转染细胞、未转染细胞以及加入BDNF培养的细胞进行MTT比色分析，比较不同组的细胞生长活性。
4. 应用Annexin V-FITC凋亡检测试剂盒和流式细胞仪，检测rAAV-BDNF转染细胞、未转染细胞以及加入BDNF培养的细胞的凋亡比率。
结果 1. 提取的rAAV-BDNF 转染细胞的总RNA完整，无降解。RT-PCR检测结果显示，转染细胞表达外源性BDNF基因，而未转染细胞不表达。
2. rAAV-BDNF 转染细胞的培养液中BDNF的含量：转染7天后为616.1±40.0pg/mL，转染14天后为1075.1±48.7 pg/mL。
3. MTT比色结果显示：在转染3天和6天后，rAAV-BDNF转染细胞与未转染细胞的OD值无显著性差异（p>0.05），在转染9天后，转染细胞的OD值高于未转染细胞（p<0.01）。在以上时间点，加入BDNF培养的细胞的OD值均高于未转染细胞（p<0.01）。
4. 流式细胞仪检测结果显示rAAV-BDNF转染细胞和加入BDNF培养的细胞的凋亡比率明显低于未转染细胞的凋亡比率 （p<0.05）。
结论 rAAV-BDNF可有效转染体外培养的鼠RGCs，转染细胞可在转录水平和翻译水平表达外源性BDNF基因，且生长活性改善，凋亡减少。这为青光眼视神经保护的基因治疗提供了理论和技术支持。
关键词 重组腺伴随病毒载体；脑源性生长因子；视网膜神经节细胞；体外；转染；逆转录-聚合酶链反应；酶联免疫吸附试验；凋亡
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