| 目的：利用毕赤酵母表达系统实现有活性的重组人微小纤溶酶原的高效表达和分泌，初步探讨其在诱导玻璃体后脱离方面的作用。
方法：构建表达质粒pAO815-3mPlg，转化酵母SMD1168，筛选有人微小纤溶酶原表达的阳性菌株。大规模培养后进行初步纯化获得较纯的重组人微小纤溶酶原（r-mPlg）并进行活性测定。取新鲜的离体猪眼20只，随机分为4组。第一组作为正常对照，第二组每只眼玻璃体腔注入0.1ml BSS，第三组每只眼注入1000IU/0.1ml重组链激酶（r-SK），第四组每只眼注入1000IU/0.1ml r-SK联合3U/0.1ml r-mPlg， 37℃孵育60分钟后固定，用光镜、扫描电镜和透射电镜进行形态学观察。
结果：成功获得了r-mPlg的表达，表达量达30mg每升培养液，初步纯化后获得纯度97％且有潜在纤溶活性的r-mPlg。动物实验发现1000IU r-SK与3U r-mPlg联合注入组后极部发生玻璃体后脱离，内界膜表面光滑，并且没有对视网膜造成毒性破坏。而其他三组均未发生玻璃体后脱离。
结论：r-mPlg能够通过毕赤酵母表达系统获得高效表达，并且具有潜在纤溶活性。1000IU r-SK与3U r-mPlg联合注入离体猪眼玻璃体腔60分钟可以诱发后极部玻璃体后脱离而对视网膜无毒性作用。 |
