| Purpose
通过自体造血干细胞动员使外周血内成体造血干细胞(hematopoietic stem cells HSCs)倍增，探讨此方法是否可提供一种生理性新生血管的严密调节状态，使其环境诱导分化修复受损的视网膜微血管内皮细胞，进一步使血－视网膜屏障得到功能性重建，从而逆转或延迟糖尿病视网膜病变从非增殖期到增殖期的病理改变。
Methods
应用小鼠干细胞生长因子（murine SCF）， 200μg/Kg/d和重组人粒细胞集落刺激因子（rhG-csf）50μg/Kg/d联合连续5日对糖尿病小鼠和非糖尿病小鼠分别进行自体HSCs动员，以生理盐水皮下注射为对照。应用流式细胞术以CD34-/low和 sca1+为标记鉴定外周血HSCs。应用免疫组化方法以CD31和BrdU标记新生的视网膜血管内皮细胞，PAS组织染色标记成熟的视网膜血管内皮细胞，同时观察VEGF在视网膜的表达。半定量RT-PCR检测血管内皮生长因子（VEGF）,可溶性血管内皮生长因子受体2（VEGFR-2），血管生成素2（ang－2）在视网膜的表达情况。应用伊文思兰定量检测血－视网膜屏障的破坏程度。
Results
自体干细胞动员可以使正常小鼠和糖尿病小鼠外周血中产CD34-/low and Sca1+细胞数目倍增。在免疫组化切片上观察到了糖尿病小鼠CD31 标记的新生血管数目增多，内皮细胞更生速度加快。以BrdU 与CD31的免疫组化双重染色中，观察到了在新生毛细血管内皮细胞两种抗原双重表达的现象。自体干细胞动员可使小鼠视网膜VEGFR2(KDR/FLK-1)(KDR/FLK-1)含量明显增高，干细胞动员可以明显下调糖尿病小鼠VEGF和Ang-2的表达量。在VEGF免疫组化切片中，自体干细胞动员使糖尿病小鼠VEGF表达量下降。糖尿病可导致血－视网膜破坏（P=0.008），而自体HSCs动员后白蛋白渗出量在正常小鼠轻微上升，其影响无统计学意义（P=0.186）。但是自体HSCs动员可以明显减轻糖尿病视网膜的白蛋白渗出量（P=0.033），有效改善糖尿病小鼠血管通透性。
Conclusions
自体HSCs动员可以通过外周血干细胞倍增，环境诱导分化为血管内皮细胞，双向调节VEGF和Ang-2等血管渗漏性相关因子， 实现治疗性血管重建，使血－视网膜屏障得到一定程度的功能性修复。
|
