目的:为模拟视网膜色素上皮(RPE)细胞在眼内多种病理条件下的状态,制作RPE细胞的定量损伤、受力牵拉、电场负载以及复制衰老模型,以利于研究眼内多种病理条件下RPE细胞的细胞生物学特性。
方法:(1)定量损伤模型:培养融合的单层RPE细胞,用直径6mm的角膜环钻放在培养板上,力量适中,以能获得压痕,从上方伸入消毒棉签将环钻覆盖区内细胞轻轻刮去,轻柔冲洗脱落细胞;(2)受力牵拉模型:首先进行磁珠包被,将Ⅰ型胶原吸附在磁珠上,然后将此复合物加入培养RPE细胞中,在培养箱中孵育48小时后,洗除未结合的磁珠,然后以一块矩形永磁铁给细胞施加垂直方向磁场作为牵拉模型;(3)电场负载模型:特制细胞培养小室,两端施加6V/cm的电压作为电场负载模型;(4)复制衰老模型:培养RPE细胞通过增加传代次数的方法,制作出复制衰老细胞大于总数80%RPE复制衰老模型,并以β-半乳糖苷酶活性检测;
结果:(1)定量损伤模型可以获得有固定损伤量的RPE损伤模型,可以帮助定量检测RPE损伤后细胞因子、基因等的表达;(2)用磁力方法制作的受力牵拉模型,通过检测模型中细胞因子的表达及其抑制因素,可以帮助发现视网膜脱离过程中参与的细胞因子和相关因素;(3)通过电场负载,可以发现RPE细胞发生形态、分布、移行以及细胞骨架的变化,且这些变化与电场相关;(4)培养20代的RPE细胞中可见阳性细胞数目为87%,可以作为RPE细胞复制衰老模型;
结论:通过以上特殊条件模型的建立,可以模拟视网膜脱离前期、视网膜脱离后以及电场作用下的RPE状态,同时复制衰老模型对于老年性黄斑变性的研究有一定意义。
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