| 目的：探讨视网膜缺血再灌注(RIR)损伤的发生机制及雌激素对大鼠RIR损伤的保护作用和机制。 方法：96只健康成熟雌性SD大鼠切除双侧卵巢。按RIR前、RIR后12h、24h、48h、72h 5个时间点随机分为对照组和实验组。切除卵巢术后2周，实验组在升高眼内压前2h皮下注射17β-雌二醇(100µg/kg)。采用升高眼内压的方法造成视网膜缺血，1h后恢复正常眼内压使视网膜血供恢复，建立大鼠RIR模型。分别于各时点测定血清雌激素浓度。常规HE染色，行病理组织学检查及视网膜内层厚度测量。TUNEL法检测GCL凋亡细胞数。免疫组化染色、原位杂交法观察视网膜的bcl-2、bax、caspase-3蛋白表达及定位；caspase-3和NF-κB p65 mRNA表达及分布。荧光实时定量RT-PCR法定量检测大鼠视网膜bcl-2、bax、caspase-3基因表达情况，比较两组间扩增效率的差异。 结果：各时点的实验组和对照组大鼠血清雌激素浓度差异明显。RIR后24h、48h、72h，实验组RGCs数较对照组多，具有统计学意义。RIR后72h视网膜内层厚度实验组较对照组厚。RIR前大鼠视网膜未见被TUNEL法标记的阳性细胞。RIR后12h,对照组视网膜内层已有少量凋亡细胞；24h凋亡细胞数达峰,且主要发生在视网膜内层。RIR后各时点实验组凋亡细胞数较对照组减少，24h、48h两组比较，差异具有统计学意义。两组大鼠RIR前，视网膜组织中未见bcl-2、bax、caspase-3阳性表达。对照组在RIR后12h，可见bax、caspase-3蛋白表达，主要见于GCL的部分区域；RIR后24h，蛋白表达明显升高，视网膜内层可见棕黄色染色；RIR后48h、72h, 蛋白表达下降。对照组无bcl-2蛋白表达。实验组在各时点的bax、caspase-3蛋白表达较对照组少，差别有统计学意义。bcl-2蛋白于RIR后12h可见表达；RIR后24h，视网膜内层可见棕黄色染色；其后表达下降。两组大鼠RIR前，视网膜组织中无NF-κB p65、caspase-3mRNA表达。对照组在RIR后12h，NF-κB p65、caspase-3mRNA主要见于GCL的部分区域；RIR后24h，caspase-3、NF-κB p65 mRNA表达升高，GCL、IPL、INL可见棕黄色染色。RIR后48h、72h caspase-3、NF-κB p65 mRNA表达量减少。实验组在RIR后24h、48h、72h视网膜caspase-3、NF-κB p65 mRNA表达较对照组少，差别有统计学意义(p<0.05)。RIR后视网膜可检测到凋亡基因caspase-3、bax、bcl-2的表达。各时点的bcl-2扩增效率实验组高于对照组，差异有统计学意义；而caspase-3扩增效率低于对照组，差异亦有统计学意义。在RIR后24h、48h两组bax差异具有统计学意义。 结论：前房灌注升高眼内压是制作RIR损伤的有效模型。RIR损伤主要表现为视网膜内层的变薄，神经节细胞的凋亡。雌激素对RIR大鼠神经节细胞损害具有一定保护作用。其可能通过抑制凋亡基因表达和增强凋亡抑制基因的表达，抑制RGCs的凋亡发挥作用。 |
