目的:本研究通过H2O2刺激人晶状体上皮细胞,观察H2O2对细胞增殖活性的影响,小窝蛋白在晶状体上皮细胞膜上及细胞浆内的分布变化,以及细胞内小窝蛋白表达量的改变。
方法:采用SAR01/04人晶状体上皮细胞,给予1mmol/l的H2O2分别刺激0、5、10、15、30和60分钟,MTT法观察细胞的增殖活性。用激光共聚焦显微镜观察小窝蛋白的在细胞膜上和细胞浆内分布的改变。通过Wstern-blot方法检测小窝蛋白表达量的变化。用SPSS12.0统计软件包进行数据处理分析。
结果:H2O2作用时间越长,细胞增殖活性越低,作用时间达到30分钟左右,与未作用组间的细胞增殖活性有显著性差异(P<0.05)。通过激光共聚焦显微镜,观察到人晶状体上皮细胞含有丰富的小窝蛋白。在无刺激情况下,小窝蛋白主要分布于细胞膜上。在H2O2刺激以后,小窝蛋白在细胞膜及细胞浆内的分布逐渐增多,而细胞浆内增多的幅度大于细胞膜上的幅度。作用时间达60分钟时,细胞膜有溶解趋势,但仍可见小窝蛋白的分布。Wstern-blot方法检测发现,随着作用时间的延长,小窝蛋白在细胞上的表达量呈逐渐减少的趋势。
结论:氧自由基的损害是造成细胞凋亡的一个主要因素,而晶状体上皮细胞的凋亡是导致年龄相关性白内障发生的一个主要机制。H2O2可对细胞的增殖活性产生明显的影响。在H2O2的作用下,细胞的小窝蛋白重新分布,可能参与了细胞间的信号转导过程。随着H2O2刺激时间的延长,细胞上的小窝蛋白的表达量减少,推测小窝蛋白可能与白内障的发生有关,具体机制仍有待于进一步研究。
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