目的:观察人羊膜匀浆上清液对兔角膜上皮细胞的生长和增殖的影响,观察人羊膜匀浆上清液促进兔角膜碱烧伤后角膜上皮和基质恢复的作用,为临床上用人羊膜匀浆上清液点眼治疗眼碱烧伤提供理论依据。
方法:
1、 体外实验:将兔角膜上皮细胞离体培养,用MTT比色法观察羊膜匀浆上清液在不同浓度(培养液中羊膜匀浆蛋白含量分别为40、80、160μg/ml)条件下和不同时相点(24、48、96h)时对兔角膜上皮细胞培养增殖的影响。
2、 体内实验:先取16只(32眼)家兔随机分为4组:生理盐水对照组、1:1羊膜匀浆组、1:2羊膜匀浆组、1:3羊膜匀浆组。每组8只眼,碱烧伤后每天行荧光素染色并在裂隙灯下观察角膜上皮愈合情况,每组在术后第1天、第3天、第7天照相,根据角膜上皮愈合情况最后选择1:2羊膜匀浆组为试验组。然后取15只家兔(30只眼)分为3组:对照组(生理盐水点眼)、羊膜匀浆组(1:2羊膜匀浆点眼)、bFGF组(贝复舒眼液点眼),碱烧伤后每天行荧光素染色并在裂隙灯下观察角膜上皮愈合情况,每组在术后第1天、第3天、第5天、第7天和第14天照相观察角膜上皮愈合率和新生血管生长面积率情况,第1天、第3天、第7天、第14天取材观察胶原纤维排列、成纤维细胞数量和白细胞计数。
结果:
1、角膜上皮细胞增殖检测:随着时间的延长(24、48、96小时),角膜上皮细胞增殖相差显著(P<0.05),随着羊膜匀浆上清液浓度增高(40μg/ml、80μg/ml、160μg/ml),角膜上皮细胞增殖相差显著。
2、角膜上皮愈合率:兔角膜碱烧伤后第1天和第3天,羊膜匀浆组与bFGF组、对照组相比,差异显著(P<0.05), bFGF组和对照组间无显著差异。第5天、第7天,羊膜匀浆组、bFGF组和对照组间相比差异非常显著(P<0.01),而羊膜匀浆组和bFGF组间无显著差异。
3、角膜新生血管面积率:碱烧伤后第7天和第14天,各组间新生血管面积率均无显著差异(P>0.05)。
4、角膜基质修复:碱烧伤后第7天和第14天,羊膜匀浆组与对照组相比角膜基质胶原纤维排列整齐。
5、白细胞计数:碱烧伤后早期(3天内),羊膜组与对照组、bFGF组相比差异显著(P>0.05)。
结论:
1、羊膜匀浆上清液有明显促进兔角膜上皮细胞增殖的作用,且呈剂量依赖性。
2、羊膜匀浆上清液能促进角膜上皮愈合,且在早期应用即能发挥作用。
3、羊膜匀浆上清液能促进角膜基质有序修复
4、羊膜匀浆上清液有抗炎作用。
5、羊膜匀浆上清液对角膜新生血管无明显促进和抑制作用。
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