目的:利用外源性尿激酶型纤溶酶原激活剂(uPA)、纤溶酶原激活剂抑制剂-1(PAI-1)激活或抑制小鸡后极部巩膜内源性TGF-β1表达与活化,观察它们对小鸡形觉剥夺性近视眼(FDM)形成的影响并检测后极部巩膜基质金属蛋白酶2(MMP-2)与特异性基质金属蛋白酶2抑制剂(TIMP-2)表达变化,以阐明TGF-β1表达变化对FDM形成的影响及其作用的可能分子机制。
方法:随机选取1d来亨雏鸡单眼遮盖(MD)制备FDM动物模型,同时往遮盖眼分别球后注射uPA 500U/50ml、PAI-1 50U/50ml或PBS 50ml进行干预处理,每日一次,连续14d。单纯遮盖者作为阴性对照组。同时另随机选取1 d来亨雏鸡不予遮盖,分别进行上述干预作为对照。上述各小组每组25只小鸡。实验前及14 d后每组随机选取10只小鸡分别检测实验眼眼轴长度及屈光度。摘除实验眼球、取后极部巩膜、冰冻切片,HE染色法观察组织病理学变化,免疫组化法检测TGF-β1、MMP-2、TIMP-2表达变化。逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)一步法检测TGF-β1、MMP-2、TIMP-2 mRNA表达变化,明胶酶谱法检测后极部巩膜MMPs表达变化。
结果:uPA可明显抑制遮盖眼与正常眼眼轴延长与近视性屈光度增加,而PAI-1仅对正常眼具促进作用,对遮盖眼无作用;单眼遮盖可明显抑制剥夺眼后极部巩膜TGF-β1、TIMP-2蛋白及mRNA表达,而MMP-2酶活性及mRNA表达明显升高,而uPA干预可显著阻止上述现象发生,PAI-1对此无作用;uPA尚可轻度上调正常非遮盖眼后极部巩膜TGF-β1蛋白与mRNA表达水平及下调MMP-2酶活性与mRNA表达,而PAI-1作用正好相反,可显著下调TGF-β1表达与上调MMP-2表达。
结论:后极部巩膜内源性TGF-β1为小鸡FDM形成的重要调控因子,其作用极可能与调节后极部巩膜MMP-2/TIMP-2表达平衡密切相关。
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