目的:通过对新鲜人羊膜和不同保存方法及保存时间保存的人羊膜匀浆提取液中抗新生血管增生物质——色素上皮源性生长因子(pigment epithelium-derived factor, PEDF)含量的检测,探讨人羊膜在眼表重建过程中对新生血管增生的防治作用及其适宜保存方法和保存时间。
方法:取健康剖宫产产妇胎盘,无菌操作下剥离其羊膜,称湿重后剪成约1.0x 1.0 cm2大小,分装于灭菌小瓶中,随机分为四组,分别置于:①DMEM+甘油(1:1)-70℃;②纯甘油-70℃;③DMEM+甘油(1:1)4℃;④纯甘油4℃冰箱内保存。保存时间分别为1、2、4、6、8周。取出保存的羊膜,采用低温超声粉碎并匀浆,离心提取羊膜上清液,用ELISA法检测其PEDF含量,同时取新鲜羊膜作为对照。
结果:①新鲜羊膜组PEDF含量为6.5245±0.4921 mg/L;②与新鲜羊膜比较,四种保存方法保存1周的羊膜PEDF含量显著减低,差异均具有显著性(P <0.05); ③随着保存时间的延长,四组保存羊膜中PEDF含量不断减少,但以DMEM+甘油-70℃保存组PEDF含量减少相对缓慢。④DMEM+甘油-70℃保存6周的羊膜,与其他三组保存羊膜比较,PEDF含量差异无显著性。
结论 (1)新鲜人羊膜中含有丰富的抗新生血管增生抑制因子PEDF;(2)随着保存时间的延长,羊膜中PEDF含量不断减少,但以DMEM+甘油(1:1)-70℃保存方法对PEDF含量影响相对较小。(3)DMEM+甘油-70℃保存法保存羊膜的时间不宜超过6周,否则其抗新生血管活性作用显著减低。
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