| 目的 应用钙通道拮抗剂-维拉帕米（Verapamil，Ver）作用于体外培养人视网膜色素上皮细胞（RPE），观察其对RPE细胞增生抑制及诱导RPE细胞凋亡作用，并对凋亡过程中的信号转导途径作一探讨。
方法 原代培养人RPE细胞，2-6代用于本实验。应用80mg/Lver作用体外培养人RPE细胞12、24、48小时，MTT法检测Ver对RPE细胞增生抑制率；吖叮橙（AO）荧光染色法、透射电镜、流式细胞术法检测Ver诱导 RPE细胞凋亡； Fluo-3/AM负载技术检测凋亡过程中RPE细胞内[Ca2+]i的变化；逆转录聚合酶链反应（RT-PCR）、细胞免疫组织化学、蛋白印记法（Western-blot）检测凋亡抑制基因Bcl-2以及Caspase-8、Caspase-3的表达。
结果 1处于对数生长期的HRPE细胞经80mg/Lver作用不同时间后，细胞数明显减少，RPE细胞生长明显抑制，12、24、48h细胞增生抑制率（%）分别为13.55±3.91、16.71±5.31、42.34±2.53，组间比较，差异有显著性（F=170.1797，P＜0.01）， 48h抑制率最高。2荧光显微镜下，经80mg/Lver作用的RPE细胞，可见凋亡细胞呈圆形，体积明显缩小，细胞核内可见致密浓染的黄色荧光。3 透射电镜下，ver作用24h时，细胞核内出现染色质边集及染色体固缩，电子密度增强，细胞体积变小，细胞浆浓缩，其内细胞器保存较好，细胞浆内可见空泡增多，细胞膜保存完整，可见细胞膜芽生出泡现象。48h时可见核染色质浓缩和细胞膜芽生出泡。4流式细胞仪检测结果，Ver作用12h时，G0/G1期前可亚二倍体峰，24、48h亚二倍体峰逐渐增高。Ver作用12、24、48h的凋亡率（%）分别为8.21±1.20﹑16.14±4.60﹑23.93±3.63，组间比较，差异有显著性意义（F=12.3415 P<0.05）,随着时间的延长，凋亡率逐渐增加。5正常HRPE细胞显示Ca2+荧光分布，胞核荧光最强，胞浆次之。正常RPE细胞及Ver作用RPE细胞12、24、48h时[Ca2+]i（nmol/L）分别为197.25±29.03、176.09±25.88、156.45±20.60、135.28±21.18，组间比较，具有显著性差异（F=23.607 P＜0.01）。 6 RT-PCR显示，Bcl-2表达逐渐下降，而Caspase-8未见有表达，Caspase-3表达增强；免疫组化检测可见bcl-2表达降低； Western-blot检测caspase-3表达增强。
结论：一定浓度的Ver可抑制体外培养的人RPE细胞增生，并诱导RPE细胞凋亡；凋亡过程中RPE细胞内钙浓度呈下降趋势，钙离子浓度减低是RPE细胞凋亡的启动信号；同时凋亡过程中Bcl-2表达下降， caspase-3表达增强，本实验条件下，未见有caspase-8的表达。表明在RPE细胞凋亡过程中，细胞内钙、Bcl-2、Caspase-3均参与凋亡的发生，而caspase-8未参与凋亡的发生
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