| 目 的：通过体外及体内实验探讨早期糖尿病状态对于蛋白激酶C（protein kinase C，PKC）表达的影响，以及PKC的激活与内皮素（endothelin，ET）系统的关系，并采用PKC抑制剂进行干预实验。
方 法：采用体外培养的人脐静脉内皮细胞（human umbilical vein endothelial cell，HUVEC）及链脲佐菌素（streptozotocin，STZ）诱导的早期糖尿病大鼠模型，酶联免疫吸附法（enzyme-linked immunoabsorbent assay，ELISA）测定细胞膜和细胞浆PKC活性，半定量逆转录聚合酶链反应（reverse transcription-polymerase chain reaction，RT-PCR）测定HUVEC细胞ET-1 mRNA和大鼠视网膜内ET-1、ET-3以及受体ET-A和ET-B mRNA的表达，免疫细胞化学染色测定HUVEC细胞ET-1的表达，免疫组织化学染色测定视网膜及视网膜血管组织内ET-1的表达，同时观测PKC抑制剂GF109203X对高糖培养基中的HUVEC细胞ET-1 mRNA及蛋白表达的影响，并通过玻璃体内给予PKC抑制剂GF109203X后观测对正常及糖尿病大鼠ET系统的影响。
结 果：（1）高糖培养基（含25 mM葡萄糖）中的HUVEC细胞较低糖培养基（含5.5 mM葡萄糖）中的HUVEC细胞膜PKC活性升高39％，而细胞浆PKC活性则无明显改变，且在将高糖培养基恢复至低糖培养基48 h后，HUVEC细胞膜PKC活性恢复正常；病程为2周的糖尿病大鼠视网膜内细胞膜PKC活性较正常组明显升高，达45％，而细胞浆PKC活性则无明显改变。（2）高糖培养基中的HUVEC细胞随着培养时间的延长，ET-1 mRNA及蛋白的表达逐渐增强，至72 h达到高峰，其后逐渐下降；予以10-5、10-6、10-7 M GF109203X后, HUVEC细胞ET-1 mRNA及蛋白水平较对照组明显下降，呈剂量依赖关系。糖尿病大鼠视网膜及视网膜血管组织内ET-1 mRNA及蛋白水平较正常组明显升高，而ET-3及受体ET-A和ET-B mRNA水平则无明显改变；糖尿病大鼠分别予以10-5、10-6、10-7 M GF109203X玻璃体腔内注射后，视网膜内ET-1 mRNA及视网膜血管组织ET-1蛋白水平较对照组明显下降，呈剂量依赖关系，而对ET-3及受体ET-A和ET-B mRNA水平则无明显影响。正常大鼠予以10-5 M GF109203X玻璃体腔内注射后，视网膜内ET-1、ET-3、受体ET-A和ET-B mRNA水平以及视网膜血管组织ET-1蛋白水平则无明显改变。
结 论：（1）高葡萄糖状态下，不仅可导致早期糖尿病大鼠视网膜PKC的激活，而且可使体外培养的血管内皮细胞中的PKC激活，高葡萄糖水平是导致PKC激活的重要原因。（2）糖尿病状态下，对视网膜ET系统的影响主要表现在ET-1表达的增加，视网膜内ET-1表达增加可能是糖尿病早期PKC激活所导致的视网膜内血流量下降的重要原因之一。PKC抑制剂可抑制糖尿病状态下ET-1的表达增加，而对ET-3及受体ET-A、ET-B的表达和正常生理情况下的ET 系统则无明显影响。 |
